[发明专利]一种抗人SIRPα的单克隆抗体及其细胞株、制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于医学生物工程技术领域。具体地说，本发明涉及一种抗人信号调节蛋白α(SIRPα)的单克隆抗体、分泌该单克隆抗体的细胞株及该单克隆抗体的制备方法和应用。

背景技术

信号调节蛋白α(SIRPα)是属于免疫球蛋白超家族的成员(IgSF)。在1996年的MOLECULAR AND CELLULAR BIOLOGY杂志和1997年发表的NATURE杂志中，大鼠的蛋白酪氨酸磷酸酶SIRPα首先被鉴定。SIRPα也叫SHPS1、CD172α、P84、MYD1、BIT、PTPNS1等，是一种主要表达于髓系细胞的跨膜蛋白，GeneID：140885。SIRPα胞外区含有三个免疫球蛋白超家族(IgSF)结构域和多个糖基化位点。其胞浆区在大鼠，小鼠和人之间高度保守，带有两个免疫受体酪氨酸抑制基元(ITIMs，其特征氨基酸序列为“I/VxYxxL”)，其中包含四个酪氨酸残基。由于其特殊的细胞定位和结构，决定了它在不同细胞中传递不同的信号，发挥不同的功能。

SIRPα在细胞内传递信号主要通过胞内酪氨酸残基的磷酸化。其胞外区的三个Ig样结构域SIRPα可被多种有丝分裂原活化而发生磷酸化，如血清、胰岛素、生长因子、EGF、PDGF以及神经营养因子等。SIRPα被磷酸化后能结合带有SH2结构域的蛋白磷酸酶SHP-1和SHP-2使之活化，并作为其底物被去磷酸化。SIRPα的胞外区与特异性配体相结合，也是其实现信号转导功能的重要途径。目前对SIRPα的特异性配体研究比较多的是另一种膜蛋白CD47。与SIRPα的严格组织细胞表达不同，CD47在大部分细胞类型都有表达，因此SIRPα与CD47复合体在SIRPα介导的信号转导中起着重要作用，包括介导细胞吞噬、迁移和细胞因子分泌等。

由于SIRPα的组织分布主要在髓系(巨噬细胞，树突状细胞等)，因此SIRPα在机体免疫调节中的作用已被日益重视。总的来说，在免疫系统中SIRPα通过与CD47相互作用发挥负向调节作用。在天然免疫中，LPS可通过转录抑制和蛋白降解途径诱导巨噬细胞中SIRPα表达下调，SIRPα通过屏蔽SHP-2作用抑制MAPK、IKKs、NF-κB和IRF3激活，减少炎性因子IL-6、TNFα和IFNβ释放。但用SIRPα抗体与SIRPα结合，能促进巨噬细胞分泌一氧化氮，这从另一方面说明了SIRPα有可能在天然免疫中起到一定的正向调节作用。在SIRPα与获得性免疫关系的研究中，利用CD47-Fc段融合蛋白作为配体与DC表面SIRPα相互作用，能观察到DC表型和功能的抑制，包括DC成熟标志减少，细胞因子IL-12分泌减少。DC表面的SIRPα与T细胞表面的CD47相互结合，双向负调节DC和T细胞功能：一方面，抑制DC活化，下调其抗原递呈能力；另一方面，抑制T细胞增殖和杀伤功能。但是也有研究用抗-SIRPα抗体刺激SIRPα的胞外区可以有效降低静息性记忆T细胞的增殖。研究人员还证实了SIRPα突变体小鼠对实验诱导的自身免疫性脑脊髓炎、胶原性关节炎和2，4二硝基-1-氟苯诱导的接触过敏有很强的抵抗能力；同样，CD47缺失小鼠也能抑制包括胶原性关节炎和接触性过敏在内的自身免疫性疾病，这说明了SIRPα在一定程度上促进了自身免疫性疾病的产生。SIRPα的这一功能主要与SIRPα抑制Th17细胞分泌IL-17相关，Th17是机体一类重要的调节性T细胞，是免疫系统反应过激的抑制因素，在SIRPα突变体小鼠诱导自身免疫性疾病模型中，可以检测到IL-17表达上调。除了对免疫细胞功能的调节外，SIRPα对免疫细胞的发育也起了至关重要的作用。在小鼠脾细胞中，SIRPα在CD8a⁺CD11c⁺DCs细胞膜上表达大大强于CD8a^-CD11c⁺DCs，当转基因鼠表达突变SIRPα时，脾细胞中CD8a⁺CD11c⁺DCs比例明显减少。

检测SIRPα在临床实践中也有现实意义。SIRPα在某些白血病细胞中下调，检测SIRPα的表达可以帮助确定其亚型；检测SIRPα的表达可以帮助鉴定DC亚群；检测SIRPα的表达也可以确定巨噬细胞的活化状态。而现有的SIRPα抗体没有很好的能同时进行免疫印迹、流式检测和免疫组化检测的。并且现有的功能性SIRPα抗体多为封闭型或抑制型，而没有激活型的。

发明内容

本发明所要解决的技术问题之一是：提供抗人信号调节蛋白α(SIRPα)的单克隆抗体。