[发明专利]甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法

权利要求书

1.一种甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：用PTCR4 SSR标记，其SSR引物序列：

上游引物5′-CATAGGTTCAAACCATACCCGTG-3′

下游引物5′-CTCATCTTTGTAGGGTATAATACC-3′

扩增不同甜樱桃品种(系)的DNA，可扩增出255bp的扩增片段，标志着花粉S基因存在，通过琼脂糖电泳检测获得电泳图；

根据琼脂糖电泳图，确定各品种的自交不亲和基因型：相同谱带为同一S基因型，反之为不同S基因型。

2.根据权利要求1所述的甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：25μL SSR扩增反应体系中含有10×PCR buffer 2.5±0.25μL，2.5mmol·L^-1 dNTPs 2.0±0.2μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)2.0±0.2μL，1U Taq DNA聚合酶1±0.1μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)1±0.1μL。

3.根据权利要求1所述的甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：20μLSSR扩增反应体系中含有10×PCR buffer2.0±0.2μL，2.5mmol·L^-1 dNTPs 1.6±0.16μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)1.6±0.16μL，0.8U Taq DNA聚合酶0.8±0.08μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)0.8±0.08μL。

4.根据权利要求1所述的甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：15μLSSR扩增反应体系中含有10×PCRbuffer 1.5±0.15μL，2.5mmol·L^-1 dNTPs 1.2±0.12μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)1.2±0.12μL，0.6U Taq DNA聚合酶0.6±0.06μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)0.6±0.06μL。

5.根据权利要求1所述的甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：10μLSSR扩增反应体系中含有10×PCR buffer 1.0±0.1μL，2.5mmol·L^-1 dNTPs 0.8±0.08μL，MgCl₂(2.5mmol·L^-1)0.8±0.08μL，0.4U Taq DNA聚合酶0.4±0.04μL，SSR上、下游引物(5pmol·μL^-1)0.4±0.04μL。

6.根据权利要求1所述的甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：扩增热循环参数为：94℃预变性3～7min，然后94℃变性40～50s，51～53℃退火40-50s，72℃延伸0～60s，共28个循环，最后72℃延伸7min。

7.根据权利要求1所述的甜樱桃品种自交不亲和S基因型的SSR分子标记鉴定方法；其特征是：标记引物PTCR4PCR扩增产物经2.5％的琼脂糖凝胶电泳检测。