[发明专利]一种放射性铼标记人纤溶酶原kringle5蛋白及其制备方法

权利要求书

1.一种核素标记rhk5蛋白，其特征在于，所述核素为¹⁸⁸Re。

2.如权利要求1所述的¹⁸⁸Re-rhk5的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)rhk5蛋白的表达，形成羧基端连接6×His·Tag的融合蛋白；

(2)三羰基铼标记rhk5：

1)取5mg BH₃·NH₃放入干燥西林瓶中，加盖密封，通CO气体约20min；

2)在1mL¹⁸⁸ReO^4-的生理盐水淋洗液中，加入7μL浓H₃PO₄；

3)混匀后注射到已通好CO的西林瓶中，70℃水浴加热15min；

4)测定反应后生成的中间体fac-[¹⁸⁸Re[(CO)₃(H₂O)₃]⁺的螯合率；

5)三羰基铼标记rhk5，优化后的标记条件为：rhk520μg，加入0.1mL¹⁸⁸ReO^4-淋洗液，调节溶液的pH值为5.0，充分混匀后，置50℃水浴中温育1h。

3.根据权利要求2所述的¹⁸⁸Re-rhk5的制备方法，其特征在于，步骤(1)rhk5蛋白的表达包括如下步骤：

将Kringle 5基因片段构建入原核表达载体质粒pET-22b(+)→氨基端加入信号肽序列→羧基端加入6×His序列→当pET-22b(+)-k5在BL21-CodonPlus感受态菌被诱导后，在rhk5氨基端表达信号肽段，并在氧化环境下形成二硫键，同时切除信号肽，形成羧基端连接6×His·Tag的融合蛋白。

4.根据权利要求2所述的¹⁸⁸Re-rhk5的制备方法，其特征在于，步骤(1)rhk5蛋白的表达包括如下步骤：

将Kringle 5基因片段构建入真核表达载体质粒pFastbacl→羧基端加入6×His序列→当pFastbacl-rhk5在27℃培养的昆虫sf9细胞内孵育后，以可溶性方式表达rhk5蛋白，并在氧化环境下形成二硫键，形成羧基端连接6×His·Tag的融合蛋白。

5.根据权利要求2所述的¹⁸⁸Re-rhk5的制备方法，其特征在于，步骤(2)中测定反应后生成的中间体fac-[¹⁸⁸Re[(CO)₃(H₂O)₃]⁺的螯合率，以GF254硅胶薄板为固定相，V_甲醇∶V _浓盐酸＝99∶1为流动相，在放射性薄层扫描仪上进行测定。

6.根据权利要求2所述的¹⁸⁸Re-rhk5的制备方法，其特征在于，步骤(2)中使用磷酸缓冲液调节溶液的pH值为5.0。

7.如权利要求1所述的¹⁸⁸Re-rhk5在抑制肿瘤生长中的应用。