[发明专利]重组人表皮生长因子工程菌的构建方法

权利要求书

1.重组人表皮生长因子工程菌的构建方法，其特征在于重组人表皮生长因子工程菌的构建方法按以下步骤进行：一、根据大肠杆菌偏爱密码子设计重组hEGF人工序列，然后合成重组OmpA-hEGF人工序列，再将重组OmpA-hEGF人工序列连接到质粒pMD上，合成出质粒pMD-OmpA-hEGF；二、质粒pMD-OmpA-hEGF和质粒pSE分别经XhoI和EcorI进行双酶切，回收所需目的片段，连接并构建质粒pSE-OmpA-hEGF；三、将质粒pSE-OmpA-hEGF转化到大肠杆菌BL21-Codon plus^TM中，即完成重组人表皮生长因子工程菌的构建；其中步骤一中根据大肠杆菌偏爱密码子重组hEGF人工序列的基因序列如下：CCCTCGAGTTAACGCAGTTCCCACCATTTCAGGTCACGGTACTGGCAACGTTCACCGATGTAACCAACAACACAGTTGCACGCGTATTTGTCCAGAGCTTCGATATACATGCAAACACCATCGTGTAGGCAGTAACCGTCGTGAGACAGCGGGCATTCAGAGTCGGAATTGGCCTGCGCTACGGTAGCGAAACCAGCCAGTGCCACTGCAATCGCGATAGCTGTCTTTTTCATGAATTCCG。

2.根据权利要求1所述的重组人表皮生长因子工程菌的构建方法，其特征在于步骤二中pMD-OmpA-hEGF双酶切的体系如下：

成分                 用量

pMD-OmpA-hEGF        20μL

XhoI                 2.5μL

EcorI                2.5μL

Buffer 10×H         2.0μL

H₂O                  20μL。

3.根据权利要求1所述的重组人表皮生长因子工程菌的构建方法，其特征在于步骤二中pSE双酶切的体系如下：

成分                用量

pSE                 10μL

XhoI                2.5μL

EcorI               2.5μL

Buffer 10×H       5.0μL

H₂O                 30μL。

4.根据权利要求1所述的重组人表皮生长因子工程菌的构建方法，其特征在于步骤二中连接的体系如下：

成分                          用量

10×T₄ DNA连接酶缓冲液        1.0μL

酶切后的pMD-OmpA-hEGF         1.0μL

酶切后的pSE                   0.2μL

T₄DNA连接酶                   1.0μL

H₂O                           6.8μL。