[发明专利]一种培养金龟子绿僵菌的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种培养金龟子绿僵菌的方法。

背景技术

化学农药的大量使用对环境生态造成了严重的影响，生物防治日益被人们所重视，利用昆虫病原微生物防治害虫是生物防治的重要手段之一。虫生真菌种类多，代谢类型复杂，以其安全有效，显著的流行潜力，容易大量生产等优点，在害虫的生物防治中占有越来越重要的地位。绿僵菌是世界性分布的杀虫真菌，能寄生8个目30个科约200种昆虫、螨类及线虫。利用绿僵菌防治害虫的研究已有百年，它致病力强、效果好，对人、畜、作物及害虫天敌无毒害，是当今用于生物防治的虫生真菌研究的主要对象之一。

目前，对金龟子绿僵菌的培养方法一般都生产周期长、菌剂含孢量低、成本高，阻碍了对金龟子绿僵菌的生产进程。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种培养金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)的方法。

本发明所提供的培养金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)的方法，包括如下步骤：1)用液体培养基对金龟子绿僵菌(Metarhizium anisopliae)进行液体发酵培养，将容器内的所有物质记作液体发酵产物；2)将所述液体发酵产物接种于固体发酵培养基，进行固体发酵培养，得到金龟子绿僵菌。

上述方法中，所述步骤1)中，所述液体发酵培养的条件为：温度为28℃，通入空气的量为10L/min/35L所述液体培养基和所述容器内的气压为0.03Mpa。

上述方法中，所述步骤1)中，液体发酵培养至液体发酵产物呈如下状态：液体发酵产物中有菌丝及液生孢子，液体发酵产物中菌丝体中无液泡，液体发酵产物中无断裂的菌丝。

上述方法中，所述步骤1)中，液体发酵培养的时间为65小时～72小时，具体为65小时、68小时或72小时。

上述方法中，所述步骤1)中，所述液体培养基由玉米粉、豆饼粉、蛋白胨、KH₂PO₄、MgSO₄、KCl、FeSO₄·7H₂O和水组成；所述各组分的配比为：20g玉米粉∶40g豆饼粉∶2.5g蛋白胨∶0.5gKH₂PO₄∶0.5gMgSO₄∶0.5gKCl∶0.01gFeSO₄·7H₂O∶1000ml水。

上述方法中，所述步骤2)中，所述固体发酵培养的方式按照如下a阶段、b阶段和c阶段依次进行：

a阶段：在温度为24℃、湿度为95％(体积百分含量)的条件下培养；

b阶段：在温度为28℃、湿度为80％(体积百分含量)的条件下培养；

c阶段：在温度为28℃、湿度为40％(体积百分含量)的条件下培养。

上述方法中，所述步骤2)中，所述a阶段的培养时间为2天-3天；所述b阶段的培养时间为2天；所述c阶段的培养时间为2天。

上述方法中，所述步骤2)中，所述接种的量为：使所述液体发酵产物与固体发酵培养基的体积比为20∶80。

上述方法中，所述步骤2)中，所述固体发酵培养基由甘蔗渣、麸皮、玉米粉、KH₂PO₄、MgSO₄、KCl和水组成；所述各组分的质量份数比为：300-400份甘蔗渣∶150-200份麸皮∶90-150份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶300-400份水；

所述各组分的质量份数比具体为：300份甘蔗渣∶150份麸皮∶150份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶300份水，或350份甘蔗渣∶180份麸皮∶120份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶350份水，或400份甘蔗渣∶200份麸皮∶90份玉米粉∶0.5份KH₂PO₄∶0.5份MgSO₄∶0.5份KCl∶400份水。

上述方法中，所述麸皮为小麦麸皮。

上述方法中，所述步骤2)中，所述培养过程中包括翻料的步骤。