[发明专利]一种与PHBV的3-HV单体合成相关的β-酮硫解酶及其编码基因与应用

权利要求书

1.一种蛋白质，是如下1)或2)的蛋白质：

1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列组成的蛋白质；

2)将序列1的氨基酸序列经过一个或几个氨基酸残基的取代和/或缺失和/或添加且与聚羟基丁酸羟基戊酸酯合成和/或3-羟基脂肪酸合成相关的由1)衍生的蛋白质。

2.权利要求1所述蛋白的编码基因。

3.根据权利要求1或2所述编码基因，其特征在于：所述编码基因为如下1)、2)、3)或4)的所示的基因：

1)序列表中序列2自5’末端第955-2106位核苷酸所示的DNA分子；

2)序列表中序列2自5’末端第791-2119位核苷酸所示的DNA分子；

3)在严格条件下与1)或2)限定的DNA分子杂交且与聚羟基丁酸羟基戊酸酯的合成和/或3-羟基脂肪酸的合成相关的DNA分子；

4)与1)或2)限定的DNA序列至少具有90％同源性且编码与聚羟基丁酸羟基戊酸酯合成和/或3-羟基脂肪酸合成相关蛋白的DNA分子。

4.含有权利要求2或3所述编码基因的重组载体、转基因细胞系和重组菌；含有权利要求2或3所述编码基因的菌。

5.根据权利要求4所述的重组载体或重组菌，其特征在于：所述重组载体为在载体pWL102的多克隆位点插入权利要求2或3所述编码基因得到的重组载体；所述重组菌为将权利要求2或3所述编码基因导入宿主菌得到的重组菌。

6.根据权利要求4所述的菌，其特征在于：所述含有权利要求2或3所述编码基因的菌为极端嗜盐古菌(Haloferax sp.)XH1001 CGMCC No.3822。

7.根据权利要求4所述的重组菌，其特征在于：所宿主菌为极端嗜盐古菌，优选为极端嗜盐古菌(Haloarcula hispanica)或极端嗜盐古菌(Haloferax mediterranei)，尤其优选为极端嗜盐古菌(Haloarcula hispanica)CGMCC No.1.2049。

8.权利要求1所述蛋白在合成聚羟基丁酸羟基戊酸酯和/或3-羟基戊酸中的应用，或权利要求2或3所述编码基因在合成聚羟基丁酸羟基戊酸酯和/或3-羟基戊酸中的应用。

9.一种制备聚羟基丁酸羟基戊酸酯的方法，发酵权利要求4或7所述重组菌，得到聚羟基丁酸羟基戊酸酯，所述聚羟基丁酸羟基戊酸酯中3-羟基脂肪酸的摩尔百分比高于发酵所述宿主菌得到的聚羟基丁酸羟基戊酸酯中3-羟基脂肪酸的的摩尔百分比。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于：所述发酵的方法为：1)将所述重组菌接种于AS-168培养基，在37℃培养至对数生长期，得到对数期菌株；每升AS-168培养基按如下方法配制：将5.0g酸水解酪素，5.0g酵母提取物，1.0g谷氨酸钠，3.0g柠檬酸钠，200g NaCl，20g MgSO₄·7H₂O，2.0g KCl，0.36g FeSO₄·4H₂O和0.36mg MnCl₂·4H₂O溶于水中，用水补足体积；所述AS-168培养基的pH值为7.2；

2)再将所述对数期菌株接种到MG培养基，在37℃培养3天，得到聚羟基丁酸羟基戊酸酯；每升所述MG培养基按如下方法配制：将200g NaCl，20g MgSO₄·7H₂O，2.0g KCl，1g谷氨酸钠，37.5mg KH₂PO₄，50mg FeSO₄·7H₂O，0.36mg MnCl₂·4H₂O，1g酵母提取物和20g葡萄糖溶于水中，用水补足体积；所述MG培养基的pH值为7.2。