[发明专利]紫背天葵叶片组织培养的方法及其专用培养基

说明书

技术领域

本发明涉及植物组织培养领域，特别涉及一种紫背天葵叶片组织培养的方法及其专用培养基。

背景技术

紫背天葵，学名Gynura bicolor DC，别名紫背菜、两色三七草、红背菜、观音菜，为菊科三七草属多年生宿根草本植物。其整个植株呈紫绿色，叶长卵型，边缘有锯齿，叶面绿色略带紫，背面紫红色具蜡质，有光泽，是有药用价值的野生蔬菜。紫背天葵作为一种值得推广的高营养保健蔬菜，含有较为丰富全面的营养成分，除一般蔬菜所具有的营养物质外，还富含可提高动物抗病能力，并对恶性生长细胞具有中度抗性的黄酮类化合物及铁、锰、锌等对人体有益的微量元素。在我国南方一些地区更是把紫背天葵作为一种补血的“良药”，是产后妇女食用的主要蔬菜之一。同时它也是很好的天然红色素原料，这种色素就是花青素。随着众多的合成色素被发现有毒害作用以及人们保健意识的增强，传统工业合成色素的应用范围逐步缩小，前期影响广泛的“苏丹红”事件使人们谈“红”色变；植物体花青素作为一种天然色素，安全、无毒、资源丰富，具有相当的营养和药理作用，对人类健康影响广泛，在食品、化妆品以及医药等方面有着巨大的应用潜力。

紫背天葵可用扦插及种子繁殖，但主要采用扦插繁殖。但是长期使用无性繁殖易感染病菌，需用种子繁殖更新，或用组培技术脱毒重新育苗。组培技术具有繁殖速度快、不受季节影响等优点，同时建立高效的再生体系也是植物遗传转化的前提，利用转基因技术可以丰富种质资源，提高作物的抗逆性或改良其品质。

对现有文献进行检索发现，林碧英、林义章在《植物生理学通讯》2003年第39卷第4期346页发表了题为“紫背天葵的组织培养和快速繁殖”；陈银龙等在《现代农业科技》2006年7月刊发表了“紫背天葵的组培快繁技术”，但两者所采用的外植体均为在带芽茎段，属于快繁技术，并不属于经典组织培养方法。

遗传转化过程中，以叶片等为外植体的经典组培方法，要比以带芽茎段为外植体的快繁方法更有利于减少产生嵌合体，假阳性的现象。迄今为止，国内外尚未有紫背天葵以叶片为外植体的组织培养的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种紫背天葵叶片诱导愈伤组织的专用培养基。

本发明的紫背天葵叶片的愈伤组织诱导培养基，是在MS基本培养液中添加如下物质得到的固体培养基：2，4-D、6-BA、碳源和凝胶剂；

上述愈伤组织诱导培养基中2，4-D的终浓度是1-3mg/L、6-BA终浓度是0.2-1mg/L；

上述愈伤组织诱导培养基中的MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

表1.MS基本培养液的溶质

上述紫背天葵叶片的愈伤组织诱导培养基中2，4-D的终浓度优选是2mg/L，6-BA的终浓度优选是0.5mg/L。

上述紫背天葵叶片的愈伤组织诱导培养基中凝胶剂可以是琼脂、卡拉胶或Gelrite等，优选可是琼脂；所述琼脂的终浓度是7-9g/L；愈伤组织诱导培养基中的碳源可以是葡萄糖、麦芽糖或蔗糖等，优选为蔗糖，蔗糖的终浓度是20-40g/L。

本发明的另一目的在于克服上述现有技术的不足，提供一种以紫背天葵叶片为外植体进行生产紫背天葵再生苗的方法。

本发明的生产紫背天葵再生苗的方法，包括以下步骤：

1)将紫背天葵叶片置于上述愈伤组织诱导培养基上培养，诱导得到愈伤组织；

2)将步骤1)得到的愈伤组织在分化培养基上培养，获得丛生芽；

3)将步骤2)中获得的丛生芽进行诱导生根培养得到再生苗。

上述步骤1)、步骤2)和步骤3)中培养的培养条件均可为：温度为24-27℃，光照时间为14-18小时/天，光照强度为2000-3000lux。

上述步骤2)中，分化培养基是在MS基本培养液中添加噻苯隆(TDZ，N-苯基-N′-1，2，3-噻二唑-5脲)、AgNO₃、碳源和凝胶剂得到的固体培养基；其中噻苯隆(TDZ)的终浓度为0.2-0.8mg/L，AgNO₃的终浓度为2-6mg/L；MS基本培养液的溶剂是水、溶质如表1所示。

上述分化培养基中噻苯隆(TDZ)的终浓度优选为0.5mg/L，AgNO₃的终浓度优选为4mg/L。

本发明方法还在步骤2)和步骤3)之间还包括一丛生芽的伸长培养，所述伸长培养是将步骤2)得到的丛生芽接种到伸长培养基上培养，得到伸长的丛生芽。上述伸长培养的培养条件与步骤1)、步骤2)和步骤3)的培养条件一致。