[发明专利]人瞬时受体电位通道蛋白荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法和用途

说明书

技术领域

本发明涉及人瞬时受体电位通道蛋白荧光定量PCR检测试剂盒及其制备方法和用途。属于生物技术领域。

背景技术

瞬时受体电位通道(简称：TRPC)是一种非选择性阳离子通道家族(包含TRPC1～TRPC7)，对钙离子具有通透性，该家族蛋白具有六个高度保守跨膜区，根据结构和功能的相似性可以分为4个亚组：TRPC1；TRPC2；TRPC3、TRPC6和TRPC7；TRPC4和TRPC5。TRPC可通过同源或异源四聚体方式组合构成功能性SOCC通道，后者介导产生SOCE引起细胞钙内流，TRPC表达异常引起SOCE的变化影响细胞生命活动，参与多种良恶性疾病，例如：呼吸系统疾病：哮喘、慢性阻塞性肺疾病、特发性肺动脉高压；心血管系统疾病：心肌肥大、高血压、脉管炎；泌尿系统疾病：局灶性节段性肾小球硬化症；神经系统疾病：神经退行性变、肌营养不良；免疫系统疾病：T/B细胞免疫反应(炎症反应)和肿瘤疾病：肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌、胃癌和食管癌等。尤其是TRPC基因表达在肿瘤发生发展中的作用开始受到广泛关注。因此，阐明TRPC的分子机理对于各种疾病的诊断和治疗至关重要。

实时荧光定量聚合酶链反应技术(RT-qPCR)是指在PCR反应体系中加入荧光基团，实时收集累积荧光信号强度监测整个PCR进程，建立实时扩增曲线并确定Ct值，最后通过标准曲线对未知模板进行始点定量分析的方法。具有灵敏度高、特异性强、线性关系好、操作简单等优点，可高通量的进行基因定量检测及相对表达分析。广泛应用于人类各种疾病的基因快速检测、早期诊断、基因分型等方面。目前采用该方法进行基因定量分析首先需要设计、合成基因特异性的引物，并反复对该引物进行效率和特异性的检测，最终筛选出合适的引物。因此，过程相对繁琐、耗时、操作性低。

发明内容

本发明的第一个目的，是为了提供一种人瞬时受体电位通道蛋白荧光定量PCR检测试剂盒。

本发明的第二个目的，是为了提供一种人瞬时受体电位通道蛋白荧光定量PCR检测试剂盒的制备方法。

本发明的第三个目的，是为了提供一种人瞬时受体电位通道蛋白荧光定量PCR检测试剂盒的用途。

本发明的第一个目的可以通过如下措施达到：

人瞬时受体电位通道蛋白荧光定量PCR检测试剂盒，它包括盒体，在盒体内设有反应板和阳性对照品，其特征在于：在反应板中设有若干反应孔，所述反应板包括荧光定量PCR标准曲线反应板和荧光定量PCR待测样品反应板；在荧光定量PCR标准曲线反应板、荧光定量PCR待测样品反应板中设有目的基因TRPC1～TRPC7反应混合液和内参基因IP08反应混合液，所述目的基因TRPC1～TRPC7反应混合液包括TRPC1～TRPC7基因引物序列、SYBR荧光染料、DNA聚合酶和反应离子缓冲液，所述内参基因IP08反应混合液包括IP08基因引物序列、SYBR荧光染料、DNA聚合酶和反应离子缓冲液；所述目的基因TRPC1～TRPC7反应混合液和内参基因IP08反应混合液设置在反应孔中。

本发明以Gene Bank中瞬时受体电位通道(TRPC)基因转录产物(信使核糖核酸，mRNA)为模板，设计、合成人TRPC基因引物，通过标准化实时荧光定量聚合酶链反应技术，筛选出高效、特异的TRPC基因引物，并将这些引物同其它PCR反应成分制作成的瞬时受体电位通道(TRPC)基因荧光定量检测试剂盒。

本发明的第一个目的还可以通过如下措施达到：

本发明第一个目的进一步实施方案是，其特征是：

1)所述TRPC1基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：1所示；

2)所述TRPC2基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：2所示；

3)所述TRPC3基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：3所示；

4)所述TRPC4基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：4所示；

5)所述TRPC5基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：5所示；

6)所述TRPC6基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：6所示；

7)所述TRPC7基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：7所示；

8)所述IP08基因引物序列的核苷酸序列如序列表SEQ ID№：8所示。

本发明第一个目的进一步实施方案，其特征是：阳性对照品为人脑组织cDNA。