[发明专利]一种用于棉花品种真实性鉴定的DNA指纹检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及分子生物学领域，特别是，涉及一种棉花品种真实性 DNA指纹检测方法。

背景技术

随着棉花品种数量的日益增加和遗传基础的日益狭窄，使得完全 根据形态性状进行棉花品种的辨别越来越困难，给种子生产、经营、 管理、维权等诸环节带来不同程度的困难，造成诸如品种多、乱、杂 的现象。近年来，分子生物学的发展使品种鉴定进入到基因水平，与 传统的形态学方法和蛋白质电泳技术相比，DNA标记技术能揭示更多 的多态性，具有准确可靠、简单快速、易于自动化的优点，是品种鉴 定技术的发展趋势。与其它分子标记相比，以微卫星序列为基础的简 单重复序列(SSR)标记在DNA指纹鉴定上显示了独特的优越性：SSR 标记数量丰富，覆盖整个基因组，揭示的多态性高，以孟德尔方式遗 传，呈共显性。SSR标记已成为品种鉴定首选技术之一，并已在玉米， 水稻等作物上初步应用。

目前，我国棉种的真实性与品种纯度鉴定仍依靠田间小区种植鉴 定方法，需投入大量的人力、物力，成本高、耗时长，时效性差。武 耀廷，张天真，郭旺珍等进行了陆地棉品种SSR标记的多态性及用于 杂交种纯度检测的研究；马轩，杜雄明，孙君灵等进行了18个彩色棉 品系的SSR指纹分析；殷剑美，陈旭升，狄佳春等进行了杂交棉苏杂 118的SSR指纹图谱构建研究。广大科研工作者普遍认为，利用分子 标记进行棉花品种鉴定是可行的。但利用现有的分子标记技术进行品 种鉴定缺乏系统性研究，存在鉴别能力不够高、操作步骤较多、耗费 时间较长、实验成本较高等问题，不能完全适应实践检测的需要。

发明内容

本发明目的是提供一种棉花品种真实性DNA指纹检测方法，以克 服现有技术存在的上述不足。

本发明通过对DNA快速提取法、分子检测标准试验体系(包括 PCR扩增体系、电泳及银染检测)、核心引物筛选等环节进行全面系 统的研究，从实践上解决限制DNA指纹技术商业化的关键技术问题， 建立了快速准确、经济简便、稳定可靠的棉花品种DNA指纹鉴定标准 实验体系，并在此基础上开发一种适用于棉花品种真实性检测的方 法，采用该方法不仅检测结果稳定可靠，而且操作简单方便，成本低 廉，有利于技术的标准化。

本发明提供一种棉花品种真实性DNA指纹检测方法，其使用分布 于棉花全基因组26条染色体上的一套核心引物对待测品种进行检测， 所述核心引物的核苷酸序列如下所示：