[发明专利]虾白斑综合症病毒病核酸样品制备方法及虾白斑综合症病毒检测方法有效
申请号: | 201010201656.1 | 申请日: | 2010-06-09 |
公开(公告)号: | CN101838677A | 公开(公告)日: | 2010-09-22 |
发明(设计)人: | 薛仁宇;贡成良;曹广力;魏育红;朱越雄;沈卫德;周小燕 | 申请(专利权)人: | 苏州大学 |
主分类号: | C12Q1/24 | 分类号: | C12Q1/24;C12Q1/70;C12Q1/68 |
代理公司: | 苏州创元专利商标事务所有限公司 32103 | 代理人: | 陶海锋 |
地址: | 215123 江苏*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 白斑 综合症 病毒 核酸 样品 制备 方法 检测 | ||
1.一种虾白斑综合症病毒病诊断用核酸样品制备方法,其特征在于,包括以下步骤:取处死的新鲜的虾的组织,加到缓冲液III中,然后95~100℃加热3分钟以上,离心后取上清液作为核酸扩增的模板;所述缓冲液III的组成为:20mM三羟甲基氨基甲烷盐酸盐,10mM氯化钾,体积百分数0.1%曲拉通X-100,10mM硫酸铵,2mM硫酸镁。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其特征在于:每1g虾组织需要0.5~50mL缓冲液III。
3.一种虾白斑综合症病毒检测方法,包括以下步骤:
(1)采用权利要求1所述上清液为扩增模板,按照常规方法,构建环介导等温扩增体系,所述扩增体系包括缓冲液、扩增引物对、dNTP、Bst DNA聚合酶,并且,每25μL扩增体系还包括1μL上述上清液;
(2)进行环介导等温扩增反应,反应完成后,向稀释千倍至万倍后的环介导等温扩增产物中添加SYBR Green I,在紫外光激发下,通过肉眼直接观察是否有被激发出的绿色荧光结果判断检测结果。
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