[发明专利]淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法及诊断试剂盒

权利要求书

1.一种淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)包含多种不同荧光编码的羧基微球Beads，每种微球上分别共价结合针对淋巴瘤中染色体易位形成的多种融合基因的mRNA所设计的特异性核酸探针；所述的淋巴瘤中染色体易位形成的多种融合基因包含以下任意一种基因或任意组合的多种基因：API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)、NPM-ALK；

(2)针对不同淋巴瘤类型中染色体易位所形成的多种融合基因的mRNA，分别设计上下游引物，对不同的融合基因mRNA，通过逆转录PCR扩增出相应的产物；

(3)含有特异性核酸探针的微球与融合基因mRNA的逆转录扩增产物混合杂交，加入链霉亲和素-藻红蛋白Streptavidin-PE后，通过液相芯片xMAP方法检测荧光信号；

(4)将检测到的荧光信号与内参基因的荧光信号进行比较，从而确定检测样品中是否存在淋巴瘤相关的融合基因，和/或样品中融合基因的表达状况。

2.如权利要求1所述的淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的微球是平均直径为5.6μm，结合了不同荧光染料的聚苯烯微球，即色彩编码微球Color-coded beads。

3.如权利要求1所述的淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的共价结合于微球上的针对淋巴瘤中染色体易位形成的多种融合基因的mRNA所设计的特异性核酸探针，包括如下序列，其中5’端含氨基修饰：

API2-MALT1(A1446-M814)：5’-AminolinkerC12 GCTTTGATTCTTTTTCCTCAG-3’，如SEQ ID NO.1所示；

API2-MALT1(A1446-M1123)：5’-AminolinkerC12 CCAAGATTATTTAATTCATTTG-3’，如SEQ ID NO.2所示；

API2-MALT1(A1446-M1150)：5’-AminolinkerC12 TGCTCTTTATTATTTGATTCTT-3’，如SEQ ID NO.3所示；

NPM-ALK：5’-AminolinkerC12 CCTATAGTTGTTTTAAATGC-3’，如SEQ ID NO.4所示；

或者包含有上述序列或其互补序列的向5’端或/和3’端延长的序列；

或者与上述序列或其互补序列的同源性大于85％的序列；

或者与上述序列的碱基互补序列；

或者使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。

4.如权利要求1所述的淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的针对不同融合基因的mRNA所设计的上下游引物，包括如下序列，其中上游引物5’端含生物素标签：

API2-MALT1(A1446-M814)：上游引物5’-biotin CGTGGAAATGGGCTTTAGTAGAAG-3’，如SEQ ID NO.5所示；下游引物5’-TTGGGAAGTTGGTTCAACACAG-3’，如SEQ IDNO.6所示；

API2-MALT1(A1446-M1123)：上游引物5’-biotin CGTGGAAATGGGCTTTAGTAGAAG3’，如SEQ ID NO.7所示；下游引物5’-CGCCAAAGGCTGGTCAGTT-3’，如SEQ ID NO.8所示；

API2-MALT1(A1446-M1150)：上游引物5’-biotin CGTGGAAATGGGCTTTAGTAGAAG-3’，如SEQ ID NO.9所示；下游引物5’-CGCCAAAGGCTGGTCAGTT-3’，如SEQ ID NO.10所示；

NPM-ALK：上游引物5’-biotin TGTTGCCCAGATTGGACTCTT-3’，如SEQ ID NO.11所示；下游引物5’-GCAGCTTCAGTGCAATCACAG-3’，如SEQ ID NO.12所示；

或者包含有上述序列或其互补序列的向5’端或/和3’端延长的序列；

或者与上述序列或其互补序列的同源性大于85％的序列；

或者与上述序列的碱基互补序列；

或者使用上述所有序列中的任意一种或一种以上的组合。