[发明专利]淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法及诊断试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及体外诊断检测技术领域，具体涉及多种淋巴瘤相关的融合基因的液相芯片联合检测方法及其诊断试剂盒。

背景技术

淋巴瘤是一组起源于淋巴结或其他淋巴组织的恶性肿瘤，可分为霍奇金病(HD)和非霍奇金淋巴瘤(NHL)两大类，目前已成为最常见的十大恶性肿瘤之一。组织学可见淋巴细胞和(或)组织细胞的肿瘤性增生，临床以无痛性、进行性淋巴结肿大为主要表现。

黏膜相关淋巴组织(MALT)淋巴瘤是一种原发于淋巴结外的恶性淋巴瘤，其发生率约占整个淋巴瘤的40％，其中以胃肠道MALT淋巴瘤最常见。API2-MALT1是MALT淋巴瘤染色体易位产生的融合基因，在约50％的MALT淋巴瘤中可被发现，目前被看作MALT淋巴瘤特征性的遗传学改变。目前发现API2-MALT1融合基因形成的变异体主要有API2-MALT1(A1446-M541)、API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)；其中API2-MALT1(A1446-M541)相对较少，只占9％左右。

间变性大细胞淋巴瘤(ALCL)是非霍奇金淋巴瘤的一种独立类型，常呈间变性特征，是一种高度恶性淋巴瘤，5年生存率为52％。约60％-85％左右间变性大细胞淋巴瘤病例表达间变性淋巴瘤激酶(anaplastic lymphoma kinase，ALK)融合蛋白，这是由于2号染色体上的ALK基因位点的畸变所致。NPM-ALK是间变性大细胞淋巴瘤中染色体易位而形成的最常见的融合基因，由位于5号染色体上的核仁磷酸蛋白(NPM)基因与位于2号染色体的ALK基因相融合形成。

当前国内外广泛使用的分子生物学检测淋巴瘤融合基因的方法中，荧光原位杂交技术(FISH)只能进行定性检测、操作复杂；荧光定量PCR存在着检测通量的局限性，所以都还不能真正满足临床诊断检测的需要。传统的固相生物芯片(Biochip)技术存在着可重复性差、灵敏度不够好以及操作繁琐的突出弱点。因此临床上需要有一种检测方法，能够迅速、稳定、准确地对白血病的多种融合基因进行联合并行检测，液相芯片(xMAP)技术正是这样一种新型检测技术。

液相芯片能够对少量样本进行定性、定量检测，具有高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等突出优点。该系统是由许多微球为主要基质构成的，在微球的制造过程当中，掺入了两种不同的红色分类荧光，根据这两种荧光的比例不同，把球形基质分为100种，可以标记上100种不同的探针分子，能同时对一个样品中多达100种不同的目标分子进行检测。根据检测物的不同，微球表面可以共价结合各种各样的核酸检测探针，在杂交反应进行时再加上荧光标记。在同一反应体系中可以同时加入不同的检测微球，这样就可以利用少量的样本进行快速、高通量的检测。反应结束后，通过微流体技术将微球排成单列快速流经液相芯片检测仪，每个微球可同时被两束激光检测到，红色激光激发微球上的红色分类荧光，将各个不同的反应区分开来而定性；绿色激光则激发结合在待测样本上的荧光标记进行定量。当标记好的待测样本与特定微球上的探针结合在一起时，两束激光所激发的光均可被检测到。最后，通过计算机的高速数字信号处理器，可以自动统计分析得出特定微球上的平均荧光强度，从而确定检测物的种类和数量。

本发明基于液相芯片技术的高通量、操作简便、重复性好、灵敏度高、线性范围宽等突出优点，对淋巴瘤相关的多种融合基因进行联合检测，能够在临床检测上得到更好的应用。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是提供一种淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法及诊断试剂盒。该方法及试剂盒包含对API2-MALT1(A1446-M814)、API2-MALT1(A1446-M1123)、API2-MALT1(A1446-M1150)、NPM-ALK多种融合基因联合检测，可以对淋巴瘤进行临床分型，同时对患者进行疗效观察、预后及微小残留疾病进行动态监测。本检测方法及诊断试剂盒具有高灵敏度、高特异性、高准确度、检测迅速等优点。

为解决上述技术问题，在本发明的一方面，提供一种淋巴瘤相关的融合基因的联合检测方法，包括以下步骤：