[发明专利]二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒及其制备方法

说明书

技术领域

本发明是涉及生物学免疫方法的测定技术领域，特别是涉及一种以胶体金免疫层析法快速检测二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

二亚甲基双氧安非他明俗称摇头丸(MDMA)(3，4-methylenedioxymethamphetamine)，是安非他明类衍生物，是亚甲二氧基甲基苯丙胺的片剂，属中枢神经兴奋剂，是中国规定管制的精神药品。继鸦片、度冷丁、吗啡、海洛因、大麻等毒品在中国贩卖后，服用者大多是涉足舞厅的青少年。引发的社会问题极为严重。摇头丸是90年代初流行于欧美，是一种致幻性苯丙胺类毒品、是一类人工合成的兴奋剂，对中枢神经系统有很强的兴奋作用，服用后表现为活动过度、情感冲动、性欲亢进、嗜舞、偏执、妄想、自我约束力下降以及有幻觉和暴力倾向，具有很大的社会危害性，被认为是未来世纪最具危险的毒品。

像海洛因一样，MDMA给人造成的危害，除了其自身外，那就是它里边含有的各种杂质及不一的药片剂量。以我国市面上出现的“摇头丸”为例，经检测发现多数含有MDMA，或亚甲二氧基苯丙胺(MDA)，或甲基苯丙胺，掺杂物有兴奋剂咖啡因、麻黄素；麻醉药氯胺酮；有的含有抗过敏药本海拉明；镇痛药非那西丁、扑热息痛、氨基比林、咪达唑仑；镇静催眠药苯巴比妥。再说剂量，欧洲的真正的MDMA的片剂，每片重量有的20mg，有的高达150mg。我国的″摇头丸″的重量从200mg到300mg不等。滥用这样的药物，一旦出了问题，抢救起来也很困难。

国内外有关MDMA的检测主要有高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效薄层色谱法(HPTLC)、酶联免疫法等方法，这些方法虽然检测的灵敏度较高，检测结果准确，但是需要昂贵的仪器设备，对检测材料的要求也高，需要提纯处理后才能进行，且需要培训专门的实验人员，另外这些方法均不适合高通量、现场的快速检测。因此研究具有快速、便携等优点的检测方法具有现实意义。

本发明采用胶体金免疫层析技术，制备一种快速检测二亚甲基双氧安非他明的试剂盒。这种方法开始于上个世纪90年代中期，是在免疫渗滤法的基础上发展起来的，是免疫亲和技术、印刷技术、免疫标记技术和层析技术的结合。这种方法不仅具有敏感、特异、便捷、快速等特点，而且适合基层和现场使用。

发明内容

本发明的目的是提供一种便携、快速、适合于现场检测二亚甲基双氧安非他明的试剂盒，用于检测尿液中二亚甲基双氧安非他明的含量。

本发明提供了一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒。包括样品垫(1)、紧密连接于样品垫一端的含有标记二亚甲基双氧安非他明单克隆抗体的胶体金垫(2)，与胶体金垫的另一端紧密相连的硝酸纤维素膜(3)和紧密连接于硝酸纤维素膜另一端的吸样垫(4)。硝酸纤维素膜包被了两条线，其中一条包被了二亚甲基双氧安非他明偶联抗原的检测线(T线)，一条包被了羊抗鼠IgG抗体的质控线(C线)。样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸样垫粘贴在PVC支撑板(5)上形成试剂条，试剂条也可以装入塑料卡中形成卡型包装。

本发明还提供了一种二亚甲基双氧安非他明检测试剂盒的制备方法，包括以下步骤：

(1)制备二亚甲基双氧安非他明偶联抗原

将二亚甲基双氧安非他明与牛血清蛋白分子进行偶联，作为二亚甲基双氧安非他明偶联抗原。

(2)制备二亚甲基双氧安非他明单克隆抗体

用二亚甲基双氧安非他明偶联抗原采用常规方法免疫制得二亚甲基双氧安非他明单克隆抗体。

(3)制备胶体金颗粒

取0.01％的氯金酸水溶液100mL，加热煮沸。根据需要迅速加入1％枸橼酸三钠水溶液0.75mL，继续煮沸约5min，出现橙红色。这样制成的胶体金颗粒的大小为20-40nm。

(4)制备胶体金垫