[发明专利]广谱型流感疫苗及其制备方法

权利要求书

1.一种预防流感的M2e-载体蛋白偶联物，是由甲型流感H1N1病毒M2蛋白质的胞外结构域M2e或其衍生的多肽与载体蛋白化学偶联而成。

2.根据权利要求1所述的偶联物，其特征在于，所述的M2e或其衍生的多肽序列如SEQ ID NO：2所示：

SLLTEVETPTRXaa₁EWEXaa₂RXaa₃SDSSDC[SEQ ID NO：2]

其中，

Xaa₁为苏氨酸、异亮氨酸或丝氨酸；

Xaa₂为丝氨酸、天冬氨酸或半胱氨酸；

Xaa₃为半胱氨酸、丙氨酸或丝氨酸。

3.根据权利要求2所述的偶联物，其特征在于，所述的M2e的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：1所示。

4.根据权利要求2所述的偶联物，其特征在于，所述的M2e或其衍生的多肽是通过多肽固相合成方法制备，并与载体蛋白通过硫醚键共价连接。

5.根据炎奈瑟氏菌外膜蛋白P64K，破伤风类毒素，乙肝核心抗原，匙孔血蓝蛋白，轮状病毒衣壳蛋白，和牛或人乳头瘤病毒VLP的L1蛋白的任意一种；权利要求1所述的偶联物，其特征在于，所述的载体蛋白选自脑膜

所述的载体蛋白优选为脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白P64K，所述P64K的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示。

6.根据权利要求1-5中任一所述偶联物的制备方法，是先将载体蛋白用活化剂活化，再与适当比例的M2e或其衍生的多肽混合，反应得到偶联物。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述的M2e或其衍生的多肽与载体蛋白的比例为(10-20)∶1，优选为(12-18)∶1，更优选为15∶1；

所述偶联反应的pH值为6.5-7.5，优选为6.8-7.2；

所述偶联反应的时间为18-36小时，优选为24小时；

所述的活化剂为SMCC，MBS，sulfo-MBS的任意一种，优选为SMCC。

8.一种广谱型流感疫苗，其特征在于，所述的疫苗含有权利要求1所述M2e-载体蛋白偶联物中的任意一种及相应的佐剂。

9.一种HA2_18-72-载体蛋白偶联物，是由禽流感H5N1病毒HA2_18-72多肽与载体蛋白化学偶联而成。

10.根据权利要求9所述的偶联物，其特征在于，所述的HA2_18-72多肽具有SEQ ID NO：3所述的序列。

11.根据权利要求9所述的偶联物，其特征在于，所述的载体蛋白选自脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白P64K，破伤风类毒素，乙肝核心抗原，匙孔血蓝蛋白，轮状病毒衣壳蛋白，和牛或人乳头瘤病毒VLP的L1蛋白的任意一种；

优选为脑膜炎奈瑟氏菌外膜蛋白P64K，所述P64K的氨基酸序列如序列表中SEQ ID NO：5所示。

12.根据权利要求9所述的偶联物，其特征在于，所述的HA2_18-72多肽与载体蛋白通过硫醚键共价连接。

13.根据权利要求12所述的偶联物，其特征在于，所述的HA2_18-72多肽是经基因工程菌表达而来；

所述HA2_18-72多肽编码基因的核苷酸序列如序列表中SEQ ID NO：4所示；

所述基因工程菌优选为大肠杆菌Ecoli.BL21。

14.根据权利要求9-13中任一项所述的偶联物的制备方法，是先将载体蛋白用活化剂活化，再与适当比例的HA2_18-72多肽混合，反应得到偶联物。