[发明专利]广谱型流感疫苗及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，特别是涉及广谱型流感疫苗及其制备方法。

背景技术

流感是由流感病毒引发的呼吸道传染性疾病，是到目前为止仍然对人类公共安全带来巨大威胁的疾病之一，人类历史上曾出现三次世界性大流感，导致5000万至1亿人死亡，超过两次世界大战死亡人数的总和。

流感病毒的主要特点是病毒株变异快、疫情传播速度快，危害性大。在自然界中，人和其它动物均是流感病毒的宿主，而发生于不同宿主的病毒株重组现象使新的流感病毒株不断地出现，给人类预防和控制流感疫情带来严峻的挑战。

到目前为止，预防性流感疫苗是控制流感病毒引发疫情的最佳方式，针对流感病毒变异快、会发生抗原漂移或抗原突变等特点，世界卫生组织在全球建立了流感疫情监控网络，应用现代流行病学和生物技术手段，分析在下一个流感季节流行的病毒株，并以此为基础，确定在全球的不同区域的疫苗生产用毒株，用于预防性疫苗的生产。

流感病毒株具有高度变异性，在不同的时间或不同的地点流行的流感病毒株血清型也存在较大的差异，因此，世界卫生组织根据流感病毒流行学调查和预测，不断更新病毒疫苗株，以预防流感的流行和蔓延。但是流感流行病学调查和预测具有不确定性，而且相对于流感的快速爆发和流行，用流行的病毒株研制生产疫苗有滞后效应等不利因素，因而不能有效地实现对流感的预防和控制。

传统流感疫苗生产技术路线采用鸡胚培养法，而要在短时间内提供大量鸡胚、生产出满足健康人群大规模免疫接种的流感疫苗客观上存在很大的困难，这种矛盾在大流感爆发期间特别明显。因此，传统流感疫苗生产技术不利于在短时间内生产出大量流感疫苗，不能及时的在健康人群中建立有效的免疫屏障，控制流感的大规模流行和蔓延。

因此，研制对不同血清型的流感病毒均有预防保护效果的疫苗——广谱型流感疫苗成为全球疫苗研究领域的热点。

在甲型流感病毒粒子和病毒感染的膜上表达了三种类型的跨膜蛋白(Krystyna Mozdzanowska et al，Vaccine.2003(21)：2616-2627)：红细胞凝集素和神经氨酸酶是分别具有大约510个和420个氨基酸的糖蛋白，相比之下，第三个跨膜蛋白为基质蛋白2(M2)，它包含的胞外结构域(M2e)在人类的流感病毒株中是高度保守的。利用M2对甲型流感病毒感染的广泛的保护性免疫已有相关研究(Frace et al，(1999)Vaccine 17：2237-44；Okuda et al，(2001)Vaccine19：3681-91)。

M2是97个氨基酸的非糖基化跨膜蛋白(Lamb et al，(1981)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 78：4170-4；Lamb et al，(1985)Cell 40：627-33)。它形成同型四聚体，在病毒颗粒的膜上以低密度表达，但在被感染的细胞的质膜上以高密度表达。M2四聚体表现出pH诱导的质子运输活性，这似乎利于RNP复合物融合后从病毒膜上的释放，防止红细胞凝集素在成熟前受酸诱导的构象变化(Steinhauer etal，(1991)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 88：11525-9；Pinto et al，(1992)Cell 69：517-28)。在23个氨基酸序列的M2e中，N-端的9个氨基酸是完全保守的，在它靠近膜的15个氨基酸的部分中仅显示出相对低程度的结构多样性。在人类分离株H1N1，H2N2，H3N2和H5N1亚型中，在7个位置出现了两个可以相互替换的氨基酸，但这些分离株的大部分实际上具有同样的序列。

M2e特异性单克隆抗体14C2在体外不能防止病毒感染，但在掺入培养基或琼脂覆盖层中时能降低病毒的产量，减小噬菌斑的大小。表明抗体介导的病毒生长限制在体内和体外是通过不同机制进行的。

使用不同类型的疫苗结构和接种形式已经测试了主动诱导的M2特异性免疫的保护效力，原因是能够导致病毒生长和死亡率的减少。

Merck公司开发出预防流感的化学偶联物，如US2004/0223976A1和CN1756562A利用流感病毒中高度保守的，具有预防保护效果的抗原片段M2e和HA0蛋白质与载体蛋白OMP偶联，目前该药物处于I期临床阶段。

Acambis公司开发出M2e-HBc VLPs，如US 7361352B2和CN1913920A，同样利用流感病毒的M2e片段，与乙肝核心抗原通过化学偶联形成抗流感病毒的嵌合体分子颗粒，目前该药物也处于I期临床阶段。