[发明专利]鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统及构建方法和应用

权利要求书

1.构建鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统的方法，所述方法包括：

1)切断所述鸭病毒性肠炎病毒的DNA，

2)将切断后的鸭病毒性肠炎病毒DNA片段连接到粘粒上，

3)选择多个粘粒组成所述鸭病毒性肠炎病毒感染性克隆系统，其中每个粘粒中克隆有鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段，所述鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段含有相互重叠的区域，并拼接覆盖鸭病毒性肠炎病毒疫苗株全基因组，和

4)将外源基因插入至少一个所述粘粒中的复制非必须区。

2.权利要求1所述的构建鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统的方法，其特征在于所述粘粒是Fosmid，优选为pCC1 Fos。

3.权利要求1所述的构建鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统的方法，其特征在于在所述鸭病毒性肠炎病毒是鸭病毒性肠炎病毒CVCCAV1222。

4.权利要求1所述的构建鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统的方法，其特征在于所述多个粘粒是5个粘粒，优选地，所述5个粘粒分别为pFOS1、pFOS2、pFOS3、pFOS4和pFOS5，其中克隆的鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段的序列分别为鸭病毒性肠炎病毒CVCC AV1222的1-44551位、36852-75346位、69314-109887位、98197-129146位和119308-158091位。

5.权利要求1所述的构建鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统的方法，其特征在于所述复制非必须区位于pFOS1中的UL45和UL46基因之间，pFOS1中的UL41基因内，或pFOS5中的US7和US8基因之间。

6.根据权利要求1-5中任一项所述方法构建的鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统。

7.一种鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统，其特征在于所述系统包括多个粘粒，每个粘粒中克隆有鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段，所述鸭病毒性肠炎病毒疫苗株基因片段含有相互重叠的区域，并拼接覆盖鸭病毒性肠炎病毒疫苗株全基因组，其中至少一个所述粘粒的复制非必须区中插入有外源基因。

8.权利要求6或7的鸭病毒性肠炎病毒感染性重组克隆系统用于构建重组鸭病毒性肠炎病毒的应用。

9.利用权利要求6或7的方法获得的重组鸭病毒性肠炎病毒株，例如rDEVul4546，其保藏号为CCTCC V201012；rDEVus78，其保藏号为CCTCCV201010；和rDEVul41，其保藏号为CCTCC V201011。

10.权利要求9的重组鸭病毒性肠炎病毒株在制备用于预防所述鸭病毒性肠炎病毒感染所引起的疾病的药物中的应用。