[发明专利]鲤鱼背肌中组织蛋白酶L的分离纯化方法

权利要求书

1.鲤鱼背肌中组织蛋白酶L的分离纯化方法，其特征在于该方法包括如下步骤：

步骤(1)取鲤鱼背肌白肉a克，加入b毫升的20毫摩尔/升Tris-盐酸缓冲液匀浆，在离心机转子温度为3～5℃、6000×g～6500×g条件下离心15～20min，得到上清液；所述的Tris-盐酸缓冲液pH为6.8～7.5，a∶b＝1∶5～10；

步骤(2)将上清液在55～65℃条件下加热3～5min，置于冰水冷却，在离心机转子温度为3～5℃、8000×g～8500×g条件下离心15～20min，获得粗酶液；

步骤(3)将得到的粗酶液经过疏水性凝胶层析，收集具有活性的组分并合并；所述的活性的组分由组织蛋白酶L专一性底物活性测定方法得到；

步骤(4)将合并后的活性的组分经过离子交换层析，再次收集具有活性的组分并合并；

步骤(5)加入硫酸铵，使硫酸铵的饱和度达到70％，离心获得沉淀；

步骤(6)在得到的沉淀中加入的MacIlvaine缓冲液复溶，得到高浓度的部分纯化酶液；所述的MacIlvaine缓冲液pH为2.5～3.5；

步骤(7)将高浓度的部分纯化酶液进行超滤浓缩，去除比组织蛋白酶L分子量低的蛋白质；

步骤(8)进行体积排阻高效液相分离，最终获得纯化后的组织蛋白酶L。