[发明专利]一种硝基呋喃类代谢物前处理检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种检测方法，尤其指一种硝基呋喃类代谢物前处理检测方法，属于食品安全检测领域。

背景技术

硝基呋喃类(Nitrofurans)是一类合成的抗菌药物，它们作用于微生物酶系统，抑制乙酰辅酶A，干扰微生物糖类的代谢，从而起抑菌作用。因价格较低廉且疗效佳，广泛用于畜禽及水产养殖鱼类，用以治疗由大肠杆菌或沙门式杆菌所引起之肠炎，养殖鱼之疥疮、溃疡病等，于饲料中添加或养殖药浴使用。由于硝基呋喃类抗菌剂及其代谢物对人体长期食入有致癌、致畸胎及安全之顾虑，1995年起欧盟(European Union)禁止硝基呋喃类抗菌剂在食用之畜禽及水产动物使用，并严格执行对输入之食用鱼、虾及禽类进行硝基呋喃的残留检测。硝基呋喃类抗菌剂原型药在生物体内代谢迅速无法检测；而其代谢物因和蛋白质结合而相当稳定，故利用代谢物的检测可反应硝基呋喃类抗菌剂的残留状况。硝基呋喃类抗菌剂常见有以下四种药物——呋喃唑酮、呋喃它酮、呋喃西林和呋喃妥因。代谢物分别为AOZ(3-amino-2-oxazolidinone)、AMOZ(3-amino-5-morpholinomethyl-2-oxazolidinone)、SEM(semicarbazide)、AHD(1-aminohydantoin)。硝基呋喃类药物、氯霉素、环丙沙星等在国际国内均为禁用渔药。人体长期大量摄入硝基呋喃类化合物，存在致癌的可能性。同时，鱼体内大量的抗生素药物残留，会使食用者产生耐药性，降低此类药物的临床治疗效果，对人体的潜在危害不容忽视。

当前检测硝基呋喃类代谢物的方法主要有两种：液相色谱-串联质谱法、酶联免疫法。液相色谱-串联质谱法的前处理时间需要16小时，且操作繁琐费时；酶联免疫法前处理时间需要16小时，且检测方法单一，一次只能检测其中的一种，检测试剂昂贵，成本高，提取操作繁琐费时。

发明内容

本发明提供了一种检测硝基呋喃类代谢物的检测方法，其检测试剂以及检测成本低，具体技术方案如下面所描述：

一种硝基呋喃类代谢物前处理检测方法，包括：(1)样品取样；(2)将样品与提取剂混合均匀并获取上清液；(3)加入提取剂重新提取并获得混合提取液；(4)在混合提取液之中加入衍生化试剂以及催化剂并混合均匀；(5)将所述混合液冷至室温；(6)将混合后的提取液调节到中性，并加入乙酸乙酯进行萃取；(7)重复操作后，合并乙酸乙酯层；(8)将其旋转蒸发至干并加入甲醇溶液溶解残渣；(9)激活净化柱将甲醇溶解液过柱并获取洗脱液吹干；(10)残留物加入乙腈水溶液以及异辛烷溶解并获取下层乙腈水层；(11)将上述乙腈水层过微孔滤膜；(12)分析并测定硝基呋喃类代谢物的成分以及含量。

进一步地，优选的方法是，所述(1)样品取样是按照下列方法进行处理的：鱼，去鳞、去皮，沿脊背取肌肉；虾，去头、去壳，取肌肉部分；蟹、甲鱼等取可食部分以及样品切成小块后，用打浆机打碎并将其均质混匀。

进一步地，优选的方法是，所述步骤(2)中，获取上清液是按照下列方法获得的：通过将样品与提取剂混合并放置于摇床振摇或超声，再离心处理。

进一步地，优选的方法是，所述步骤(4)中，在混合提取液之中加入衍生化试剂以及催化剂并混合均匀以后，再放置于摇床振摇或超声，取出冷至室温。

进一步地，优选的方法是，所述步骤(12)中采取高效液相仪器进行测定硝基呋喃类代谢物。

进一步地，优选的方法是，所述提取剂为酸性氧化铝、硅胶C18键合材料和吸附型离子交换树脂按30∶40∶30比例混合。

进一步地，优选的方法是，所述提取剂所述提取剂为三氯乙酸-甲醇溶液。

进一步地，优选的方法是，所述衍生化试剂为100μL邻氯苯甲醛、5mL冰乙酸和20mL甲醇混合液。

本发明在采取了上述检测方法以后，将前处理时间缩短到了7小时以内，解决了前处理时间长的问题；能同时检测AOZ、AMOZ、SEM、AHD四种硝基呋喃类代谢物，解决了检测项目单一的问题；检测成本低，解决了检测试剂昂贵、成本高的问题；简化提取以及衍生的操作，解决了操作过程繁琐的问题。并且检测方法准确、可靠、灵敏度高，具有较佳的技术效果。

附图说明

下面结合附图对本发明进行详细的描述，以使得本发明的上述优点更加明确。

图1是本发明硝基呋喃类代谢物前处理检测方法的流程图。

具体实施方式

下面，结合附图对本发明做进一步详细的描述。