[发明专利]一种检测荧光量子点在生物体内毒性的方法

权利要求书

1.一种检测荧光量子点在生物体内毒性的方法，其是通过检测金属硫蛋白基因的表达来评价荧光量子点在生物体内的毒性，所述荧光量子点的核或壳为重金属。

2.根据权利要求1所述的方法，其包括如下步骤：

1)根据待测动物和量子点中所含的重金属来设计合成MT引物；

2)提取待测动物样品mRNA；

3)将mRNA逆转录成cDNA；

4)利用设计的引物进行PCR扩增；

5)检测扩增产物，根据MTmRNA含量，分析量子点对待测动物的毒性大小。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于包括如下步骤：

1)MT引物设计与合成

根据待测动物和量子点中所含的重金属，在NCBI中检索出MT基因的全长序列，设计并合成MT扩增引物；

2)总RNA提取

a、取30毫克的待测样品，加1mL RNArose reagent，匀浆；

b、将匀浆液移入1.5mL的EP管中，置冰上5min，加200μL的氯仿、混匀，置冰上5min，12000rpm高速离心10min；

c、将上层水相移至1.5mL EP管中，加1∶1体积酸性酚和氯仿，混匀，置冰上5min，12000rpm离心10min；

d、将上层水相移至1.5mLEP管中，加200μL氯仿，混匀，冰上静置5min，12000rpm离心10min；

e、将上层水相移至1.5mL EP管中，加500μL的异丙醇，混匀，冰上静置5min，12000rpm离心10min；

f、弃上清，加1mL 75％乙醇漂洗沉淀，离心7500rpm，5min，弃上清；室温干燥；

3)RNA逆转录为cDNA

取5μL RNA，加入1μL 10mM的oligo dT18，混匀后，70℃变性10min，置冰上2min；

分别加入5×M-MLV Reaction Buffer，RNAsin，dNTP，DEPC水，M-MLV，37℃保温60min；

4)PCR扩增

在0.2mL EP管中加入10×TaqBuffer，MgCl₂，dNTP，引物，cDNA模板，去离子水，Taq酶，进行PCR扩增，循环条件为：94℃预变性5min；94℃30s，65℃30s，72℃30s，扩增30个循环；72℃延伸10分钟；

5)琼脂糖凝胶电泳和凝胶成像；

6)MTs含量检测：采用bandscan 5.0，计算电泳带中MTmRNA含量；分析量子点对待测动物的毒性大小。

4.一种用于检测含重金属荧光量子点在生物体内安全性的试剂盒，其包括用于扩增MT基因的特异引物。

5.根据权利要求4所述的试剂盒，其还包括内标引物。

6.如权利要求4或5所述的试剂盒，其还包括RNA提取试剂，反转录试剂以及PCR试剂中的一种或多种。

7.如权利要求要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述RNA提取试剂包括RNArose、氯仿、异丙醇和乙醇中的一种或多种。

8.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述反转录试剂包括逆转录酶、寡核苷酸dT、dNTP和RNAsin中的一种或多种。

9.如权利要求4或5所述的试剂盒，其特征在于，所述PCR试剂包括DNA聚合酶、MgCl₂和dNTP中的一种或多种。