[发明专利]一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒

权利要求书

1.一种引物组合物，为如下1)或2)所示：

1)由如下引物对a)、b)、c)和d)组成；

2)由如下引物对a)、b)、c)和d)中的至少一种组成；

a)一条引物序列如序列表中序列1所示，另一条引物序列如序列表中序列2所示；

b)一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中序列4所示；

c)一条引物序列如序列表中序列5所示，另一条引物序列如序列表中序列6所示；

d)一条引物序列如序列表中序列7所示，另一条引物序列如序列表中序列8所示。

2.一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒，为权利要求1中所述引物组合物；

所述甲型流感病毒亚型为新甲型H1N1亚型、甲型H1N1亚型、甲型H5N1亚型或甲型H3N2亚型。

3.一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的PCR试剂，由权利要求1中所述引物组合物、PCR缓冲液、dNTPs和ExTaq酶组成。

4.根据权利要求3所述的PCR试剂，其特征在于：所述a)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.2mM；所述b)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.1mM；所述c)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.1mM；所述d)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.2mM。

5.根据权利要求3或4所述的PCR试剂，其特征在于：所述dNTPs为dATP、dTTP、dGTP和dCTP的等摩尔比混合物，所述dATP、dTTP、dGTP或dCTP在所述PCR试剂中的浓度均为0.8mM。

6.权利要求1中所述引物组合物在制备用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒中的应用。

7.权利要求1中所述引物组合物在制备用于鉴别甲型流感病毒亚型的PCR试剂中的应用。

8.一种鉴别甲型流感病毒亚型的方法，包括如下步骤：用权利要求3-5中任一所述PCR试剂对待测样品的cDNA进行PCR扩增，检测PCR产物的大小，确定所述待测样品中甲型流感病毒亚型；

所述确定所述待测样品中甲型流感病毒亚型的方法为下述1)或2)所示：

1)检测所述PCR产物的序列，

若所述PCR产物中含有序列大小为495bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒新甲型H1N1亚型病毒；

若所述PCR产物中含有序列大小为363bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H1N1亚型病毒；

若所述PCR产物中含有序列大小为113bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H3N2亚型病毒；

若所述PCR产物中含有序列大小为188bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H5N1亚型病毒；

2)用琼脂糖凝胶电泳检测所述PCR产物，

若所述PCR产物在琼脂糖凝胶上显示480-510bp的条带，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒新甲型H1N1亚型病毒；

若所述PCR产物在琼脂糖凝胶上显示350-370bp的条带，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H1N1亚型病毒；

若所述PCR产物在琼脂糖凝胶上显示100-130bp的条带，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H3N2亚型病毒；

若所述PCR产物在琼脂糖凝胶上显示170-200bp的条带，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H5N1亚型病毒；

所述鉴别甲型流感病毒亚型的方法不包括疾病的治疗和诊断方法。

9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于：所述PCR扩增的退火温度为54℃。