[发明专利]一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒。

背景技术

流感病毒感染一直是人类难以攻克的公共卫生隐患。2009年3月由墨西哥传出的新型猪流感病毒swine H1N1在世界范围内广泛传播，呈爆发性流行，给人类带来了极大的损失。

流感病毒主要以甲型和乙型感染人类，其中的甲型流感病毒以H1N1，H3N2，H5N1为常见的致病亚型。最近几年发现的高致病性禽流感病毒，它可以跨越种群障碍对人类造成感染。不同亚型的流感病毒具有不同的毒力与传播特性，给感染性疾病的诊断与治疗带来了很大的困难。对于病毒亚型的快速诊断是提高病人疗效和控制病毒扩散的关键，需要寻找快速的行之有效的鉴别方法。现有技术中有用微型芯片、流式细胞术方法进行检测的，但是大多程序复杂，成本昂贵。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种引物组合物。

本发明所提供的引物组合物，为如下1)或2)所示：

1)由如下引物对a)、b)、c)和d)组成；

2)由如下引物对a)、b)、c)和d)中的至少一种组成；

a)一条引物序列如序列表中序列1所示，另一条引物序列如序列表中序列2所示；(即鉴别是否是甲型流感病毒新甲型H1N1亚型的引物对)；

b)一条引物序列如序列表中序列3所示，另一条引物序列如序列表中序列4所示(即鉴别是否是甲型流感病毒甲型H1N1亚型的引物对)；

c)一条引物序列如序列表中序列5所示，另一条引物序列如序列表中序列6所示(即鉴别是否是甲型流感病毒甲型H5N1亚型的引物对)；

d)一条引物序列如序列表中序列7所示，另一条引物序列如序列表中序列8所示(即鉴别是否是甲型流感病毒甲型H3N2亚型的引物对)。

本发明的另一个目的是提供一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒。

本发明所提供的用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒，为上述引物组合物；

所述甲型流感病毒亚型为新甲型H1N1亚型、甲型H1N1亚型、甲型H5N1亚型或甲型H3N2亚型。

本发明的另一个目的是提供一种用于鉴别甲型流感病毒亚型的PCR试剂。

本发明所提供的用于鉴别甲型流感病毒亚型的PCR试剂由上述任一所述引物组合物、PCR缓冲液、dNTPs和ExTaq酶组成。

上述PCR试剂中，所述a)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.2mM；所述b)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.1mM；所述c)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.1mM；所述d)所示引物对中的两条引物在所述PCR试剂中的浓度均为0.2mM。

上述PCR试剂中，所述dNTPs为dATP、dTTP、dGTP和dCTP的等摩尔比混合物，所述dATP、dTTP、dGTP或dCTP在所述PCR试剂中的浓度均为0.8mM。

上述任一所述引物组合物在制备用于鉴别甲型流感病毒亚型的试剂盒中的应用也属于本发明的保护范围。

上述任一所述引物组合物在制备用于鉴别甲型流感病毒亚型的PCR试剂中的应用也属于本发明的保护范围。

本发明的最后一个目的是提供一种鉴别甲型流感病毒亚型的方法。

本发明所提供的种鉴别甲型流感病毒亚型的方法，包括如下步骤：用上述任一所述PCR试剂对待测样品的cDNA进行PCR扩增，检测PCR产物的大小，确定所述待测样品中甲型流感病毒亚型；

所述确定所述待测样品中甲型流感病毒亚型的方法为下述1)或2)所示：

1)检测所述PCR产物的序列，

若所述PCR产物中含有序列大小为495bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒新甲型H1N1亚型病毒；

若所述PCR产物中含有序列大小为363bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H1N1亚型病毒；

若所述PCR产物中含有序列大小为113bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H3N2亚型病毒；

若所述PCR产物中含有序列大小为188bp的DNA片段，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒甲型H5N1亚型病毒；

2)用琼脂糖凝胶电泳检测所述PCR产物，

若所述PCR产物在琼脂糖凝胶上显示480-510bp的条带，则所述待测样品中候选含有甲型流感病毒新甲型H1N1亚型病毒；