[发明专利]一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物水溶液的生产工艺

说明书

技术领域

本发明涉及的生产工艺，是一种富含高能量物质CTP和细胞代谢调控综合剂钙离子和钙调蛋白的复合物（Ca²⁺·CaM）水溶液的生产工艺，属于生物工程技术领域。

背景技术

专利说明书ZL95116139.3公开了一种含有高能量营养物质和能促进人体生理代谢的富含CTP水溶液的生产工艺,虽然采用了“天然多菌种和酶联合分阶段连贯式发酵的独特工艺，不需要提纯菌种和酶；”但该专利生产流程中由于发酵温度偏高，发酵时间短，畜、禽肠腺菌酶混合悬液中酶的浓度不够，发酵中产生的氮气、二氧化碳、氧气的含量较低，不够大肠杆菌合成CTP的产物循环的需要，导致发酵不够充分，催化CTP合成生化反应的效率不高，产品的浓度较低，CTP等生化反应的终端产品的相对含量较低，不利于该技术的推广、应用；同时，现有国际上采用萃取法生产钙离子和钙调蛋白的复合物（Ca²⁺·CaM），与本发明相比较，具有原料选择单一、严格（仅能使用鲤鱼皮）、原料与成品的转化效率低、原料及生产费用高昂，导致终端产品价格昂贵、很难应用推广。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是：提供一种富含CTP、钙离子和钙调蛋白的复合物（Ca²⁺·CaM）水溶液的生产工艺，解决原有技术的工艺弊端。

本发明的技术方案为：

①、一级发酵处理：选瘦牛肉和鲤鱼为主要原料，天然大豆根瘤类菌体为菌种，高温灭菌大豆浆制备培养基；

将大豆根瘤类菌体的根瘤颗粒，经清洗、外膜消毒，粉碎后制成悬液，按1:10的比例将悬液注入大豆浆培养液中，在PH5、30℃条件下发酵4小时，制成一级菌种；从一级菌种开始，在同样条件下，同样按1:10的比例加上高温灭菌大豆浆，再重复做第二次、第三次，制成三级菌种；将30％的瘦牛肉浆与70％的带皮、带鳞甲鲤鱼浆制成一份混合肉浆，在高温高压条件下，作灭菌、变性处理，注入等量的大豆根瘤菌三级菌种，每公斤加入20克富含动植物蛋白酶浆液，在PH5、30℃条件下发酵12小时，然后高温高压灭活20分钟，冷却待用；

②、二级发酵处理：将畜、禽十二指肠、小肠、经清洗、外部消毒后，提取肠膜和肠液制成悬液，即得畜、禽肠腺菌酶混合悬液，再按上述大豆根瘤类菌体悬液制备三级菌种的同样方法，制得畜、禽肠腺菌酶混合三级菌种；

按未经煮熟无杂菌污染的大豆浆1份:经高温灭菌的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆3份:经高温灭菌的天门冬浆2份的比例制成混合培养基，倒入经高温灭菌后冷却的一级发酵物中；

再将畜、禽肠腺菌酶混合三级菌种按0.5:1的比例注入高温灭菌后冷却的混合肉浆一级发酵物中,再按每公斤用10毫克的比例加入VB₆,每公斤用2毫克的比例加入VB₂,每公斤用20克的比例加入富含动植物蛋白酶浆液,在PH5.6、温度30℃的条件下发酵6个小时；

③、三级发酵处理：将未经煮熟的无杂菌污染的大豆浆1份:将未经煮熟无杂菌污染的带皮、带鳞甲的鲤鱼肉浆3份:未经煮熟的无杂菌污染的天门冬浆1份:未经煮熟无杂菌污染的瘦牛肉浆一份，制成混合培养基；将此混合培养基6份与二级发酵物18份混合，并按每公斤的量加入2毫克VB₂，按每公斤的量加入20克富含动植物蛋白酶浆液，再加入10％含量为10×10⁶个/克的高浓度大肠杆菌菌液,及原料量5％的高温灭菌黄芪浆，在PH5、37℃条件下发酵1小时，发酵的同时充入1个小时的氮气和二氧化碳气体，然后在不充上述气体的情况下，继续发酵5小时，按着在上述三级混合发酵液中加入10％的富含PRPP的水溶液，10％富含尿嘧啶和胞嘧啶的水溶液，再加入原料量5％的高温灭菌黄芪浆，并按每公斤的量加入8毫克VB₂在PH6、37℃条件下发酵1个半小时，发酵的同时充入1个半小时的氧气，然后在不充氧气的情况下再继续发酵1个半小时；