[发明专利]一种Hg2+抗原和相应单克隆抗体及其制备方法

权利要求书

1.一种Hg²⁺完全免疫抗原，其特征在于：完全免疫抗原紫外吸收峰值为225nm～300nm，Hg含量达57.15μg/mg，紫外扫描结果见图1。

2.根据权利要求1所述Hg²⁺完全免疫抗原的制备方法，包括以下步骤：

称取2.6mg螯合剂Aminobenzyl-EDTA溶于0.22-0.28ml 10mg/ml、pH 6.0-7.0的Hg(NO₃)₂溶液中，37℃搅拌反应1小时，然后加入pH 6.0-7.0、1％戊二醛溶液1ml，37℃搅拌反应0.5小时；将上述反应后的混合液逐滴加入到2ml浓度为5mg/ml的KLH溶液中，边加边搅拌；调节pH值为6.0-7.0，37℃搅拌反应18小时，选用截留分子量为30000dal的超滤离心管、7500g超滤6次，洗涤液为0.1M、pH 6.0-7.0的Hepes缓冲液，每次离心15min；超滤完毕后，补加0.1M、pH 6.0-7.0的Hepes溶液，使KLH终浓度为1mg/ml，制备出完全免疫抗原。

3.根据权利要求2所述Hg²⁺完全免疫抗原的制备方法的制备方法，其特征在于：Hepes缓冲液pH值为6.5。

4.权利要求1所述Hg²⁺完全免疫抗原的单克隆抗体，其特征在于：单克隆抗体对Hg²⁺具有特异性。

5.权利要求4所述单克隆抗体的制备方法，其特征在于：用权利要求2得到的完全免疫抗原免疫BALB/c小鼠，选择对BSA-Aminobenzyl-EDTA-Hg血清效价高、对BSA-Aminobenzyl-EDTA血清效价低的小鼠加强免疫，将其脾细胞与骨髓瘤细胞融合；采用间接ELISA法筛选杂交瘤细胞株，只保留对BSA-Aminobenzyl-EDTA-Hg反应为强阳性、对BSA-Aminobenzyl-EDTA反应为阴性、对其它金属离子无交叉反应的细胞株。

6.权利要求5所述Hg²⁺抗原的单克隆抗体的制备方法，其特征在于免疫方法为：

首免：取100μl 1mg/ml的Hg²⁺完全免疫抗原，加入10μl 1mg/ml、pH 6.0-7.0的Hg(NO₃)₂溶液振荡2分钟，然后加入弗氏完全佐剂110μl，乳化，供1只小鼠1次腹腔注射免疫；

二免及以后免疫：取100μl 1mg/ml的Hg²⁺完全免疫抗原，加入10μl 1mg/ml、pH6.0-7.0的Hg(NO₃)₂溶液振荡2分钟，然后加入弗氏不完全佐剂110μl，乳化，供1只小鼠1次腹腔注射免疫，每两周免疫一次。