[发明专利]一种Hg2+抗原和相应单克隆抗体及其制备方法

说明书

技术领域

本发明公开一种Hg²⁺抗原和相应单克隆抗体，同时还提供了该抗原及单克隆抗体的制备方法，属于免疫学方法检测技术领域。

背景技术

在现代工业和日常生活中，汞的用途非常广泛，现在世界上约有80多种工业生产需要用汞作为原料。汞以“工业三废”的形式进入自然环境，不仅对自然环境造成了严重的污染，而且影响了农产品的质量，并可通过食物链及生物富集作用，最后进入人体内部。鉴于汞元素对身体极大的危害性，世界卫生组织将汞列为首要考虑的环境污染物。世界各国都十分重视环境和农产品汞污染的控制和监测。CAC规定了矿泉水中与食用盐中的汞的限量标准分别为0.001mg/kg和0.1mg/kg；欧盟对某些鱼类及其产品制定汞的限量标准为1mg/kg和0.5mg/kg；我国也制定了相应的食品卫生标准：粮食(成品粮)≤0.02mg/kg；薯类(土豆、白薯)、蔬菜、水果≤0.01mg/kg；肉、蛋(去壳)≤0.05mg/kg；牛乳≤0.01mg/kg。目前测定汞的方法主要有分光光度法、原子吸收法、原子荧光法、ICP-AES、ICP-MS。这些方法需要昂贵的分析仪器，无法用于现场检测，难以适应环境及农畜产品的现场抽查及产品进出口快速通关的要求。

为了克服以上检测方法的缺点，国内外都开展了重金属快速免疫检测技术的研究。与其它检测系统相比，免疫检测方法具有快速、廉价、简便、灵敏、特异和便携等优点，可以满足环境和农产品现场检测的需要，对提高我国环境和农产品重金属污染的控制和监测水平以及保障农产品质量安全和消费者的健康具有重要意义。

基于金属螯合物抗体的免疫检测方法为重金属检测提供了一种新的策略。建立重金属快速免疫学检测方法的关键在于重金属特异性单克隆抗体的制备，而重金属特异性单克隆抗体制备的关键在于重金属完全抗原的制备。重金属离子的分子量小，自身不能作为完全抗原诱导机体产生免疫反应。但是，重金属离子与螯合剂反应后所形成的重金属-螯合剂复合物是低分子量的半抗原，此半抗原与大分子的载体蛋白如钥孔血蓝蛋白、牛血清白蛋白、卵清蛋白等偶联形成的载体蛋白-螯合剂-重金属复合物便可作为一种完全抗原诱导小鼠发生免疫反应。因此选用结构较复杂的大分子双功能螯合剂，先与重金属离子螯合形成螯合剂-重金属复合物，再与载体蛋白偶联，即可得到完全抗原：载体蛋白-螯合剂-重金属。

目前尚无用双功能螯合剂Aminobenzyl-EDTA制备Hg²⁺完全免疫抗原及相应特异性单克隆抗体的报道。

发明内容

本发明提供了一种Hg²⁺完全免疫抗原，可用于制备重金属Hg²⁺的单克隆抗体。

本发明还提供了Hg²⁺抗原的相应单克隆抗体，对Hg²⁺具有特异性。

本发明进一步公开了Hg²⁺抗原和相应单克隆抗体的制备方法，该方法制备的抗原、单克隆抗体稳定性好、实用性强。

本发明公开的Hg²⁺完全免疫抗原，其特征在于：

完全免疫抗原紫外吸收峰值为225nm～300nm，Hg含量达57.15μg/mg，紫外扫描结果见图1。

上述Hg²⁺完全免疫抗原的制备方法，包括以下步骤：

称取2.6mg螯合剂Aminobenzyl-EDTA溶于0.22-0.28ml10mg/ml、pH6.0-7.0的Hg(NO₃)₂溶液中，37℃搅拌反应1小时，然后加入pH6.0-7.0、1％戊二醛溶液1ml，37℃搅拌反应0.5小时；将上述反应后的混合液逐滴加入到2ml浓度为5mg/ml的KLH溶液中，边加边搅拌；调节pH值为6.0-7.0，37℃搅拌反应18小时，选用截留分子量为30000dal的超滤离心管、7500g超滤6次，洗涤液为0.1M、pH6.0-7.0的Hepes缓冲液，每次离心15min；超滤完毕后，补加0.1M、pH6.0-7.0的Hepes溶液，使KLH终浓度为1mg/ml，制备出完全免疫抗原。

本发明公开的Hg²⁺抗原的单克隆抗体对Hg²⁺具有特异性。