[发明专利]用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的引物组及检测体系有效
| 申请号： | 201010217285.6 | 申请日： | 2010-07-05 |
| 公开（公告）号： | CN101892324A | 公开（公告）日： | 2010-11-24 |
| 发明（设计）人： | 赵化冰;尹光雅;赵宏;黄爱华;王俊虹;高宏生;王毅铮;孟斌;李国良;张国辉;赵国平 | 申请（专利权）人： | 中国人民武装警察部队医学院 |
| 主分类号： | C12Q1/70 | 分类号： | C12Q1/70;C12Q1/68;C12N15/11 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 12201 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300162 *** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 用环介导 恒温 扩增 技术 检测 肠道病毒 引物 体系 | ||
1.用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的引物组，其特征是它由序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列、SEQ ID NO.2所示核苷酸序列、SEQ ID NO.3所示核苷酸序列和SEQ IDNO.4所示核苷酸序列组成。
2.用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的检测体系，其特征是该体系由下述原料组成：
10×的ThermoPol缓冲液2.5μL；
25mmol/L的Mg2+ 1μL-3μL；
5mol/L的Betaine 2μL-6μL；
10mmol/L的dNTP 3.5μL-5μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列0.5μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.2所示核苷酸序列0.5μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.3所示核苷酸序列0.4μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.4所示核苷酸序列0.4μL；
8U/μL的Bst酶1μL；
加超纯水至总体积为20μL。
3.用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的方法，其特征是它包括下述步骤：
(1)提取待检测样品中的病毒RNA并逆转录为cDNA；(2)取5μL所述cDNA加入到20μL的用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的检测体系中，10000转/分钟，离心30秒；(3)加入20μL矿物油，于61℃恒温中进行环介导恒温扩增技术扩增1-1.5小时；(4)取出反应管，加入SYBR Green Ⅰ型核酸染料，若反应液变成绿色，则说明待测样品中存在肠道病毒，若为桔黄色，则说明待测样品中不存在肠道病毒，所述用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的检测体系由下述原料组成：
10×的ThermoPol缓冲液2.5μL；
25mmol/L的Mg2+ 1μL-3μL；
5mol/L的Betaine 2μL-6μL；
10mmol/L的dNTP 3.5μL-5μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.1所示核苷酸序列0.5μL；
10μmol/L的序列表中SEQ ID NO.2所示核苷酸序列0.5μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.3所示核苷酸序列0.4μL；
100μmol/L的序列表中SEQ ID NO.4所示核苷酸序列0.4μL；
8U/μL的Bst酶1μL；
加超纯水至总体积为20μL。
4.用环介导恒温扩增技术检测肠道病毒的检测体系的用途。
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