[发明专利]南芥菜花叶病毒的检测方法及专用试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及一种南芥菜花叶病毒的检测方法及专用试剂盒。

背景技术

目前植物病毒的检测方法主要包括生物学、血清学和分子生物学方法。其中血清学方法中的酶联方法由于其简单、重复性好、一次可处理多个样品而在植物病毒的检测中起到重要作用，在实际的植物病毒检测中应用广泛。酶联试剂盒中必须要提供阳性对照，而传统的阳性对照是采用某种植物病毒的感染叶片制成，如果不经过灭活处理，就有可能释放到环境中，对农作物造成影响，对于检疫性植物病毒如南芥菜花叶病毒等，具有侵染性的对照更是不允许释放到环境中的。而经过灭活处理后的对照一般不易获得。因此，需要发明一种安全的检测方法。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种用于检测样品中是否含有目标物质的酶联免疫试剂盒。

本发明所提供的用于检测样品中是否含有目标物质的酶联免疫试剂盒，包括用于包被的抗体A，用于检测的抗体B，作为阳性对照的抗体C和用于显色的酶标抗体；所述抗体A为动物Ⅰ来源的抗目标物质的抗体，所述抗体B为动物Ⅱ来源的抗目标物质的抗体，所述抗体C为抗所述抗体A的抗体；动物Ⅰ和动物Ⅱ为不同物种的动物。

上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述酶标抗体为酶标抗体D和酶标抗体E，所述抗体D为抗所述抗体B的抗体，所述抗体E为抗所述抗体D的抗体；所述抗体D为抗所述抗体C的抗体。

上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述酶标抗体为酶标抗体D和酶标抗体E，所述抗体D为抗所述抗体B的抗体，所述抗体E为抗所述抗体D的抗体，所述抗体D为抗所述抗体E的抗体；所述抗体E为抗所述抗体C的抗体。

上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述抗体A为小鼠来源的抗目标物质的抗体，所述抗体B为兔来源的抗目标物质的抗体，所述抗体C为山羊抗小鼠多克隆抗体，所述抗体D为山羊抗兔抗体，所述抗体E为兔抗山羊抗体。

上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述目标物质为植物病毒、植物细菌或植物真菌。

上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述植物病毒为南芥菜花叶病毒；所述抗体A为分泌抗南芥菜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株4G10 CGMCC No.3672分泌的单克隆抗体，所述抗体B为兔来源的抗南芥菜花叶病毒的多克隆抗体。

所述杂交瘤细胞株4G10 CGMCC No.3672分泌的单克隆抗体是通过体外培养所述杂交瘤细胞株4G10 CGMCC No.3672得到的。

上述任一所述酶联免疫试剂盒中，所述试剂盒中包括包被缓冲液、样品抽提缓冲液、酶标抗体稀释缓冲液、洗涤缓冲液、底物溶液；

每1升所述包被缓冲液按照如下方法配制：将碳酸钠1.59g，碳酸氢钠2.93g和叠氮化钠0.20g溶于水，用水定容至1L；包被缓冲液的ρH值为9.6；

每1升所述洗涤缓冲液(PBST)按照如下方法配制：将氯化钠8.0g，磷酸二氢钾0.2g，磷酸氢二钠1.15g，氯化钾0.2g，吐温200.5mL，叠氮化钠0.2g溶于水中，用水定容至1L；所述洗涤缓冲液的ρH值为7.4；

每1升所述样品抽提缓冲液按照如下方法配制：将亚硫酸钠1.3g和聚乙烯基吡咯烷酮20g溶于PBST中，用PBST缓冲液定容至1L；

每1升所述酶标抗体稀释缓冲液按照如下方法配制：将聚乙烯基吡咯烷酮20g和牛血清白蛋白2g溶于洗涤缓冲液中，用洗涤缓冲液定容至1L；

每1升所述底物溶液按照如下方法配制：将二乙醇胺97mL和对硝基苯磷酸二钠(现配现用)1g溶于水中，调节ρH值至9.8，然后用水定容至1L；

所述酶标抗体中的酶是碱性磷酸酯酶。

本发明的最后一个目的是提供一种检测样品中是否含有目标植物病毒的方法。

本发明所提供的检测样品中是否含有目标植物病毒的方法，包括如下步骤：用上述任一所述酶联免疫试剂盒对待测样品进行检测。

上述方法中，在进行所述检测前，包括如下样品前处理的步骤：所述待测样品为植物组织，将所述植物组织与所述样品抽提缓冲液混合，得到混合物Ⅰ；将所述混合物磨碎，得到混合物Ⅱ，即为待检测液体。所述植物组织具体为植物叶片。

保藏编号为CGMCC No.3672的分泌抗南芥菜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株4G10也属于本发明的保护范围。

由分泌抗南芥菜花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株4G10 CGMCC No.3672分泌得到的单克隆抗体也属于本发明的保护范围。

本发明的试剂盒中，所用水均为蒸馏水。