[发明专利]猴副流感病毒5型的RT-PCR检测方法及试剂盒

权利要求书

1.用于对SV5病毒进行RT-PCR检测的引物，是以SV5的M基因段核酸为检测对象设计的，用以定量检测样品中SV5病毒的核酸拷贝数。

2.根据权利要求1所述的引物，其特征在于：所述引物的上游引物具有序列表中SEQ ID NO：1的核苷酸序列，下游引物具有序列表中SEQ ID NO：2的核苷酸序列。

3.一种SV5病毒的RT-PCR检测方法，是以权利要求1或2所述引物进行的RT-PCR检测方法。

4.根据权利要求1所述的RT-PCR检测方法，其特征在于：所述检测方法包括以下步骤：

1)样本RNA的提取：

2)RNA的逆转录：

3)PCR检测：以步骤2)获得的病毒RNA的逆转录产物为模板，在上述引物对的引导下进行PCR扩增，反应结束后进行琼脂糖凝胶电泳检测，若能扩增出317bp的目的片段，则检测结果呈SV5阳性，反之呈SV5阴性。

5.根据权利要求4所述的RT-PCR检测方法，其特征在于：所述步骤1)中的样本可以是动物源性的生物制品、血液、离体组织或细胞培养物。

6.根据权利要求4所述的RT-PCR检测方法，其特征在于：所述步骤2)中的25ul逆转录反应体系为：去Rnase的dH₂O 7μl，5×buffer(Promega AMV ReverseTranscriptasse，catalog#M5108)5μl，dNTP(浓度2.5mM)4μl，随机引物(浓度500g/mL)0.5μl，RNA(浓度0.25μg/μl)8μl，AMV(浓度10u/μl)0.5μl；逆转录反应条件为：37℃90min，72℃15min，4℃5min。

7.根据权利要求4所述的RT-PCR检测方法，其特征在于：所述步骤3)中的20ulPCR反应体系包括：10×buffer(TaKaRa Taq^TM Hot Start Version DR007A)2μl，dNTP(浓度2.5mM)1.6μl，dH₂O 12.9μl，上游引物(浓度10μM)1μl，下游引物(浓度10μM)1μl，cDNA(浓度50ng/μl)1μl，Hs Taq酶(浓度5u/μl)0.5μl。

8.根据权利要求4所述的RT-PCR检测方法，其特征在于：所述步骤3)中的PCR反应条件为：先94℃5min；然后94℃30s，58℃30s，72℃1min，共35个循环；最后72℃5min。

9.一种用于对SV5病毒进行RT-PCR检测的试剂盒，包括权利要求1或2所述用于对SV5病毒进行RT-PCR检测的引物。