[发明专利]猴副流感病毒5型的RT-PCR检测方法及试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域中病毒的检测方法，特别是涉及猴副流感病毒5型(SV5)的RT-PCR检测方法及试剂盒。

背景技术

猴副流感病毒5型(Simian parainfluenza virus 5，SV5)是1956年首次由Hull等人从猴肾细胞培养物中分离得到，随后在人、犬等动物体内也相继分离到该病毒，在分类上SV5属于副粘病毒科，副粘病毒属，同属的其它成员包括人副流感病毒1-4型、腮腺炎病毒、新城疫病毒、仙台病毒等。

SV5在猴群中常以隐性感染的方式存在，多无临床症状，另外在豚鼠、地鼠、犬、母牛、山羊和绵羊血清中也含有高低度的SV5病毒抗体，在豚鼠中抗体阳性率达到20％，在地鼠群中抗体阳性率达到43％，表明存在SV5病毒或相关病毒的感染。SV5广泛存在于亚洲和非洲的猴群中，尤以恒河猴最为常见。在马来西亚和柬埔寨等国家的猴群中，SV5的分离率高达30-33％，抗体阳性率高达70-80％。目前我国尚未见猴感染SV5的报道，SV5也可以感染人，但未见有临床症状报道。对于SV5在其它动物群中的发生情况尚不清楚。

SV5核酸型为单股RNA，病毒粒子呈圆形，直径150-250nm，内含呈螺旋型对称的核蛋白，直径15-18nm，外围以脂蛋白囊膜，囊膜上含有纤突，为病毒的血凝素和神经氨酸酶部分。SV5可在猴、人、狒狒、牛、犬、仓鼠和豚鼠等多种动物的原代肾细胞以及BHK-21，Vero等细胞上增殖，其中以原代猴肾细胞最为易感，并可产生嗜酸性胞浆内包涵体。SV5引起的细胞病变多为形成多个核聚集在一起的多核核包体细胞，并呈环形空泡，有些细胞呈梭形。

SV5与人副流感病毒1-4型均有抗原交叉反应，与SV-41、腮腺炎病毒(mumps)、麻疹病毒(measles)也有交叉反应。病毒可存在于猴的组织器官中(尤其是肾脏)，因此常常造成猴源细胞培养物的污染。用SV5经鼻腔人工感染恒河猴，3d后即可从咽拭子中发现病毒，7d后从肺及气管中也可分离到病毒，但感染后无任何症状表现。实验条件下感染豚鼠不能引起明显的疾病，但可刺激机体产生抗体。经鼻内感染仓鼠非常易感，可以产生脑炎等症状。

SV5是单链、负义的不分节段的RNA病毒，它区别于其它副粘病毒家族病毒的一个重要特征就是其有一套最小的病毒基因组，全长15246nt，由3′端引导序列(55nt)和5′末端序列(31nt)以及七段连续性的基因组成。它们分别是：L基因(6804nt，编码聚合酶蛋白large polymerase protein)，HN基因(1789nt，编码血凝-神经氨酸酶hemagglutinin-neuraminidase)，SH基因(292nt，编码小疏水性蛋白smallhydrophobic protein)，F基因(1873nt，编码融合蛋白fusion protein)，M基因(1371nt，编码膜基质蛋白，matrix protein)，P基因(1298nt，编码磷酸化蛋白，phosphoprotein)，NP基因(1725nt，编码病毒核衣壳蛋白neucleocapsid protein)。其中P基因3′端有一小段基因又可编码V蛋白，这一小段基因又称为V基因(669nt)。V蛋白(222个残基)和P蛋白(392个残基)N末端164个氨基酸残基相同，但C末端不同。SV5在基因组结构上和仙台病毒(SeV)、口炎病毒(VSV)等病毒一个重要的区别就是：SV5基因组各个基因间结合部是具有高度可变性的，而SeV、VSV等病毒则相当保守。最近研究表明，SV5各个基因间结合部在调控聚合酶功能和衰减方面是有差别的。