[发明专利]猪血浆蛋白肽的安全性评价方法

说明书

技术领域

本发明属食品安全领域，是利用食品安全评价技术对猪血浆蛋白肽进行安全性评价。

背景技术

活性聚肽不仅具有营养作用和生物活性，而且还具有快速吸收的特点，因此活性聚肽在食品中的应用前景广阔。目前，国内对于酶解后的生物活性肽的研究集中在分离、纯化和功能性研究上，未见相关安全性及毒性研究方法的报道。但是，在食品研究与开发中为确保肽的食用安全，相关安全性及毒理学研究也是必不可少的。为评价其安全性，我们进行了急性毒性，遗传毒性实验及30天喂养实验研究，为动物血液多肽保健食品的开发和其合理安全使用提供科学依据。

发明内容

(1)猪血浆蛋白肽的小鼠急性毒性评价方法

小鼠隔夜空腹，一次性灌胃0.5g/mL质量浓度的猪血浆酶解肽，在两周内记录小鼠的死亡情况，计算LD₅₀，评价猪血浆蛋白肽的急性毒性。

(2)猪血浆蛋白肽的遗传毒性评价方法

猪血浆蛋白肽的骨髓细胞微核试验

7-12周龄的清洁级昆明种(KM)小鼠，设立3个试验组，2个对照组，各组雌雄各半。高剂量组、中剂量组、低剂量组，分别灌胃质量浓度0.5，0.25，0.125g/mL的猪血浆蛋白肽，阴性对照组灌等体积的蒸馏水，阳性对照组灌胃蒸馏水后腹腔注射环磷酰胺。两次灌胃后处死小鼠，取其胸骨骨髓涂片固定染色后在油镜下观察嗜多染红细胞，计算微核率。

小鼠精子畸形试验

成年雄性昆明种(KM)小鼠，设立3个试验组，2个对照组。高剂量组、中剂量组、低剂量组，分别灌胃质量浓度0.5，0.25，0.125g/mL的猪血浆蛋白肽，阴性对照组灌等体积的蒸馏水，阳性对照组腹腔注射环磷酰胺。连续处理5天，每天一次，5周后处死小鼠，取下双侧附睾，制备精子涂片，染色后在高倍显微镜下观察，计算精子畸形率。

(3)猪血浆蛋白肽粉的大鼠亚慢些毒性评价方法

SD大鼠，设立3试验组，1个对照组，各组雌雄各半。高剂量组、中剂量组、低剂量组，将饲料与猪血浆蛋白肽按比例每天喂养大鼠，3个试验组大鼠饲料中猪血浆蛋白肽质量分数分别为100％，50％和25％，对照组采用全价饲料喂养。连续喂养30天，观察动物一般表现、行为等特征，在试验结束时进行大鼠血常规检查、白细胞检查及血液生化指标检查。

具体实施方式

实施例1

1材料及分析方法

1.1样品

试验样品为猪血浆蛋白肽粉。

1.2供试动物

清洁级昆明种小鼠，6-8周龄，体重18～20g。

1.3统计学方法

计量资料方差分析，计数资料卡方检验。

2小鼠急性毒性实验

雌雄各10只，预饲养5d以适应环境。取猪血浆蛋白肽粉，按0.5g/mL的质量浓度与水混匀成糊状。小鼠在给予受试物前小鼠隔夜空腹禁食16h，按0.4mL/20g一次性灌胃。实验室环境温度为20～24℃，湿度为55％～60％。

连续观察2周，记录小鼠中毒症状，注意观察记录发生各种症状的时间、症状表观程度、发展的过程和死亡的数目、死亡前特征及死亡时间，计算猪血浆蛋白肽的LD₅₀，进行急性毒性分级。

实施例2

1.材料及分析方法

1.1样品

试验样品为猪血浆蛋白肽粉；

阳性对照物为环磷酰胺(现配现用)；

阴性对照物为蒸馏水。

1.2试验动物

昆明种(KM)小鼠。

1.3统计学方法

计量资料方差分析；计数资料卡方检验。以P＜0.05为有统计学显著差异。

2.遗传毒性实验

2.1骨髓细胞微核试验

7-12周龄昆明种(KM)小鼠50只，随机分为5组，每组10只，雌雄各半。编为A，B，C，D，E组，其中A组为阴性对照组，B组为高剂量组，C组为中剂量组，D组为低剂量组，E组为环磷酰胺阳性对照组。各组的处理方法：各组分别按最大灌胃容量0.4mL/20g灌胃，其中A和E组灌胃物为蒸馏水，B，C，D组灌胃物分别为质量浓度0.5，0.25，0.125g/mL的蛋白肽溶液，E组腹腔注射环磷酰胺(40mg/kg)。各组均采用全价饲料饲养，自由饮水。实验室环境温度为20～24℃，湿度为55％～60％。