[发明专利]应用AS-PCR检测牛白细胞粘附缺陷的方法

权利要求书

1.应用AS-PCR在体外检测牛白细胞粘附缺陷的方法，其步骤如下

1)设计特异性引物对，该引物对的DNA序列如下所示：

基因CD18的扩增引物：

突变型：扩增产物长度为500bp，

引物1，正向引物：5′AAGATGACGAGGAGCAGAA 3′，

引物2，反向引物：5′GTCCATCAGGTAGTACAGGC 3′；

野生型：扩增产物长度为818bp；

引物3：5′CAAGGGCTACCCCATCGA 3′，

引物4：5′CAGGACTGCGTGGCTAAA 3′；

2)PCR过程如下：

将同一份DNA样本使用2个20μL体系进行扩增：20μL体系包括10×Buffer2.0μL，25mMMg2+1.5μL，10μM用于AS-PCR反应的引物各0.5μL，10mMdNTP0.4μL，5U/μLTaq酶0.4μL，500ng/μLDNA1.0μLddH2O13.7μL，混匀、瞬时离心；

PCR反应条件：94℃预热10min，94℃变性45s，65℃45s，72℃延伸45s，从第二步94℃变性到第四步72延伸进行35个循环，72℃延伸10min，15℃10min。然后各取3μLPCR产物混合点样，1.5％琼脂糖凝胶电泳检，并记录结果。

2.权利要求1所述的引物对在AS-PCR在体外检测牛白细胞粘附缺陷中的应用。