[发明专利]一种细胞分选磁珠及合成方法以及其在细胞分选中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种新型的细胞分选磁珠，包括该磁珠的合成和修饰方法，以及使用该新型磁珠进行细胞分选的方法，属于材料科学和生物化学中的纳米生物应用技术领域。

背景技术

细胞分选是生物学和免疫学实验中的常用技术，应用磁珠分选细胞是这一领域中常用的手段，在使用磁珠进行细胞分选的方法中，关键技术为磁珠的合成。目前常用的商品化微米级磁珠的蛋白偶联量小，而纳米级磁珠由于磁性小，不易被磁铁分离，操作复杂，分离成本高。

针对上述问题，在细胞分选领域，提供一种蛋白偶联量高、超顺磁性、易于分离的纳米级磁珠，从而简化操作、降低成本，同时提供高细胞分选效率，在这一领域具有很大的意义。

发明内容

针对上述问题，本发明提供一种新型的细胞分选磁珠用于除去小鼠脾细胞中的CD3 T细胞。本磁珠同时具有蛋白偶联量高和超顺磁性的优点，分选后CD3 T细胞在脾细胞中的含量由36.5％降为0.7％，分选效率极高。本磁珠还具有制备方法简单、环境友好、成本低的优点，具有较好的应用前景。

本发明的目的是提供一种应用于细胞阴性分选的磁珠，包括以下3个部分：

1、共沉淀法合成15nm Fe₃O₄纳米颗粒，并用羟胺还原HAuCl₄的方法，在Fe₃O₄表面修饰一层金，合成50-70nm金包裹四氧化三铁磁性纳米颗粒(以下以Fe₃O₄@Au表示)；

2、用16-巯基十六酸将Fe₃O₄@Au纳米颗粒表面羧基化，通过共价偶联的protein A，特异性吸附IgG型小鼠CD3抗体的Fc段，使其定向偶联在磁珠上；

3、应用该磁珠除去小鼠脾细胞中的CD3 T细胞的方法。

为实现上述目的，本发明采取以下技术方案：

本发明提供的新型细胞分选磁珠，为表面上以共价键偶联protein A，并通过protein A与IgG的Fc段的特异性相互作用，定向偶联IgG型小鼠CD3抗体的50-70nm的金包裹Fe₃O₄磁性纳米颗粒(Fe₃O₄@Au纳米颗粒)。

本发明涉及一种新型细胞分选磁珠，其特征在于50-70nm的金包裹Fe₃O₄磁性纳米颗粒(Fe₃O₄@Au纳米颗粒)表面上以共价键偶联protein A，并进一步通过protein A与IgG的Fc段的特异性相互作用，定向偶联IgG型小鼠CD3抗体。该磁珠上CD3抗体偶联量为55-65(μg CD3抗体)/(mg磁珠)。

本发明还涉及上述新型细胞分选磁珠的合成方法，该方法包括以下步骤：(1)用共沉淀法制备15nm Fe₃O₄纳米颗粒，(2)用羟胺还原HAuCl₄的方法，在前述Fe₃O₄纳米颗粒表面包裹一层金，制得50-70nm的金包裹Fe₃O₄磁性纳米颗粒(Fe₃O₄@Au纳米颗粒)，(3)用16-巯基十六酸将前述金包裹Fe₃O₄磁性纳米颗粒(Fe₃O₄@Au纳米颗粒)表面羧基化，(4)将protein A以共价键偶联在前述被表面羧基化的颗粒上，(5)使IgG型小鼠CD3抗体通过Fc段定向固定在前一步骤制得的偶联有protein A的磁珠上。