[发明专利]一种微生物发酵生产恩拉霉素的方法

权利要求书

1.一种微生物发酵生产恩拉霉素的方法，其特征是包括以下步骤：

(1)制备冻存孢子液：

a.将杀真菌素链霉菌(Streptomyces fungicidicus)SDSL1205CGMCCNo.3933接种到多个平板培养基上进行培养，得杀真菌素链霉菌孢子；

b.将上述得到的孢子刮到甘油水溶液中，打散混匀制成孢子液，将孢子液分装在冻存管中在液氮环境中冷冻保存，待用；

(2)种子培养：将冻存孢子液接种到种子培养基中，每30L培养基接种1-2ml冻存孢子液，培养得种子液，种子液中的固形物占种子液总量的20-30体积％；

(3)发酵培养：按4-6wt％的接种量将种子液接种到发酵培养基中进行发酵培养；

发酵完毕，将发酵液过滤得菌丝体，菌丝体用甲醇浸提、离心分离得浸提液，浸提液经浓缩、结晶得到恩拉霉素结晶。

2.根据权利要求1所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是采用步骤(1)中制得的冻存孢子液制备新的冻存孢子液，其步骤为：

①用生理盐水梯度稀释冻存孢子液，将稀释的冻存孢子液接种到多个平板培养基上进行培养，得杀真菌素链霉菌孢子；

②将得到的孢子刮到甘油水溶液中，打散混匀制成孢子液，孢子液分装在冻存管中在液氮环境中进行冷冻保存，待用。

3.根据权利要求2所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是：步骤①中，将冻存孢子液梯度稀释至原先浓度的10^-8-10^-12倍，在此浓度范围内取5个梯度的稀释孢子液分别接种到5个平板培养基上进行培养，接种量均为0.1ml。

4.根据权利要求1、2或3所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是：每毫升冻存孢子液中含1.0×10⁸-1.0×10⁹个杀真菌素链霉菌孢子。

5.根据权利要求4所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是平板培养的条件为：平板培养基成分：可溶性淀粉9-13g/L、酵母浸膏1.5-2.2g/L、琼脂18-20g/L，培养基pH6.8-7.0，27-28℃下培养6-7天。

6.根据权利要求4所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是种子培养基组分及各组分的浓度为：玉米粉3.0-3.5wt％、玉米浆2.8-3.0wt％、棉籽饼粉0.3-0.5wt％、玉米蛋白粉0.5-1wt％、硫酸铵0.25-0.75wt％、硫酸亚铁0.036-0.043wt％、磷酸二氢钾0.1-0.125wt％、碳酸钙1.5-2.0wt％、泡敌0.025-0.05wt％，水余量，培养基pH7.0-7.5。

7.根据权利要求6所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是种子培养条件为：在27.5-28.5℃，通气量1.0-1.1vvm，转速200-250rpm下培养46-50h。

8.根据权利要求4所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是发酵培养基的组分及各组分浓度为：葡萄糖3.6-4.0wt％、玉米淀粉1.8-2.0wt％、玉米浆2.0-2.2wt％、玉米蛋白粉2.8-3.0wt％、棉籽饼粉1.0-1.2wt％、氯化铵0.35-0.5wt％、氯化钠1.5-1.75wt％、碳酸钙1.2-1.5wt％、泡敌0.025-0.05wt％，水余量，培养基pH7.0-7.2。

9.根据权利要求8所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是发酵培养条件为：在27.5-28.5℃，通气量0.6-1.3vvm，转速50-115rpm下发酵培养270-300h。

10.根据权利要求1、2或3所述的生产恩拉霉素的方法，其特征是：所述甘油水溶液质量分数为20％。