[发明专利]蛋清蛋白源辅助降血压肽的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及降血压肽的制备方法。

背景技术

降血压肽是血管紧张素转化酶抑制肽，血管紧张素转化酶(angiotensin-converting enzyme，ACE)抑制剂是指具有抑制ACE活性的一类多肽物质，虽然组成这些多肽氨基酸的种类和数量不同，但这类多肽都具有抑制ACE活性、辅助治疗高血压病的潜在特性功能，是当今应对高血压疾病的有效药物。从天然食品原料，如酪蛋白、乳清蛋白、鱼蛋白、大豆蛋白、大米蛋白、玉米蛋白、花生蛋白、鸡蛋蛋白等的蛋白水解物中分离出的血管紧张素转化酶抑制肽，因为安全、无副作用而广受人们的关注。现有的从卵白蛋白中分离出血管紧张素转化酶抑制肽的方法有以胃蛋白酶水解分离法和以糜蛋白酶水解分离法二种，胃蛋白酶水解分离法是Fujita(Fujita H，Sasaki R，Yoshikawa M.1995.Potentiation of the antihypertensive activity of orally administered ovokinin，a vasorelaxing peptide derived from ovalbumin，by emulsification in egg phosphatidylcholine.Biosci Biotechnol Biochem，59(12)：2344-2345)等以胃蛋白酶将卵白蛋白在强酸条件(pH＝1.6)下水解，调至中性后，以乙腈为洗脱剂，采用十八烷基硅烷键合硅胶填料的液相色谱(ODS)柱梯度洗脱脱盐，再利用反相高效液相色谱(RP-HPLC)纯化，得到一种对犬肠系膜动脉具有松弛作用的缓激肽B₁抑制肽(ovokinin)，其氨基酸序列为FRADHPFL，该法在强盐条件下水解，水解之后的中和要加入大量的碱，因此产盐量大，增加了脱盐处理的工作量；以糜蛋白酶水解分离法是Matoba (Matoba N，Usui H，Fujita H.1999.A novel anti-hypertensive peptide derived from ovalbumin induces nitric oxide-mediated vasorelaxation in an isolated SHR mesenteric artery.Fed Eur Biochem Soc Lett，452(3)：181-184)等以卵白蛋白为底物，利用糜蛋白酶在pH值为7.8、温度为37℃的条件下水解12h后，沸水浴终止反应，离心后水解物经以十八烷基硅烷键合硅胶(ODS)为填料的反相高效液相色谱(RP-HPLC)柱及苯乙基硅酸柱分离得到的肽段RADHPF，该方法处理周期长达16～20小时，反应终止温度高。

发明内容

本发明是为了解决现有的从卵白蛋白中分离出血管紧张素转化酶抑制肽的胃蛋白酶水解分离法制备过程中脱盐处理的工作量大、洗脱剂乙腈有毒及糜蛋白酶水解分离法处理周期长、反应终止温度高的问题，而提供蛋清蛋白源辅助降血压肽的制备方法。

本发明的蛋清蛋白源辅助降血压肽的制备方法按以下步骤进行：一、蛋白质水解：按蛋清与蛋白酶的质量比为100∶1～3称取蛋清和蛋白酶，将蛋清配制成浓度为3％～10％(质量)的蛋白水溶液并置于反应器中，升温至30℃～50℃，并调节蛋白水溶液的pH值至5～8，然后加入蛋白酶，在温度为30℃～50℃的条件下，搅拌2h～5h，得到蛋白水解液；二、脱盐处理：将经步骤一得到的蛋白水解液以每小时7倍～9倍柱体积的流速，先通过强酸性阳离子交换树脂柱，然后再通过强碱性阴离子交换树脂柱，收集流出液；三、分级纯化处理：将经步骤二得到的流出液在温度为20℃～35℃、压力为0.5bar～1.5bar条件下通过3kD～10kD的超滤膜，得到滤出液，最后再将滤出液经过凝胶过滤预装柱Superdex Peptide 10/300GL，收集流出液，得到蛋清蛋白源辅助降血压肽。