[发明专利]大白菜EST-SSR标记引物及其在品种鉴定中的应用

权利要求书

1.大白菜EST-SSR标记引物BRE28，它由核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示的下游引物组成。

2.大白菜EST-SSR标记引物BRE121，它由核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.4所示的下游引物组成。

3.大白菜EST-SSR标记引物BRE131，它由核苷酸序列如SEQ ID NO.5所示的上游引物和核苷酸序列如SEQ ID NO.6所示的下游引物组成。

4.权利要求1所述大白菜EST-SSR标记引物BRE28、权利要求2所述大白菜EST-SSR标记引物BRE121和/或权利要求3所述大白菜EST-SSR标记引物BRE131在大白菜品种鉴定中的应用。

5.如权利要求4所述的应用，其特征在于，步骤如下：

(1)利用改良的CTAB法提取待鉴定样品总DNA；

(2)以步骤(1)提取的待鉴定样品总DNA为模板DNA，引物为：大白菜EST-SSR标记引物BRE28、大白菜EST-SSR标记引物BRE121或大白菜EST-SSR标记引物BRE131进行PCR扩增，PCR采用20μL反应体系：

40ng模板DNA，      1×PCR buffer，

200μmol·L^-1NTPs，引物0.1μmol·L^-1，

1U TaqDNA聚合酶；

PCR扩增条件如下：

95℃预变性5min；94℃变性45s，56℃退火45s，72℃延伸1min，共计35个循环；72℃延伸10min，4℃ 10min终止反应；

(3)将步骤(2)PCR扩增后的产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显影并与标准样品聚丙烯酰胺凝胶电泳后银染显影的泳带进行对照。

6.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述的聚丙烯酰胺凝胶电泳为6％聚丙烯酰胺凝胶电泳。

7.如权利要求5所述的应用，其特征在于，所述步骤(3)中的聚丙烯酰胺凝胶电泳步骤如下：将步骤(2)PCR扩增后的产物与上样缓冲液混匀后，取4μl点样，进行电泳分离，电极缓冲液为1×TBE，在25℃、2000V恒压下电泳2h。