[发明专利]一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明属于食品加工领域，涉及一种从食用菌中提取的核苷酸混合物及其制备方法和应用。

背景技术

核苷酸类物质对甜味有增效作用，对咸、酸、苦味及腥味、焦味有掩盖和消除作用，对肉味则有增效作用，特别是核苷酸对氨基酸类鲜味物质有强烈的助鲜作用，氨基酸类鲜味物质含量在阈值以下时其鲜味是潜在性的，只要添加少量5’-核苷酸，就能使其提到阈值以上，发挥其增鲜效果。核苷酸对谷氨酸(MSG，味精)的鲜味有强大助鲜作用，12％鸟苷酸(GMP)：88％MSG，相当于MSG9.9倍的鲜度；

食用菌营养丰富，味道鲜美，具有独特的风味(包括香味和滋味)。食用菌中核酸含量丰富，水解核酸可得到核苷酸。已有的研究表明：双孢蘑菇核酸总量为2.66％；鲍鱼菇为2.93％；凤尾菇4.06％；草菇为3.88％；核苷酸在姬松茸菌丝体中达到5.51mg/g。香菇中四种核苷酸的含量分别为5’-IMP2.82mg/g、5’-GMP7.05mg/g、5’-UMP 4.25mg/g、5’-AMP 6.51mg/g，平菇子实体中可提取得到了2％以上的核酸。

目前调味品行业生产的调味核苷酸主要为5’-肌苷酸(IMP)和5’-鸟苷酸(GMP)，一般通过二种方法生产：一是发酵-转化法，利用一些生产菌株发酵生产肌苷、鸟苷后经磷酸化来生成5’-肌苷酸、5’-鸟苷酸；二是通过酵母发酵培养，对酵母破壁提取核酸，然后再通过核酸酶水解处理，经过滤澄清、除蛋白、分离等步骤获得。

我国食用菌栽培产业发展迅速，已经成为粮、棉、油、果、菜外的第六大农业产业，食用菌产量巨大，而大量的食用菌下脚料没有利用，食用菌中核酸含量高，是制备核苷酸重要的原料来源，利用食用菌及其下脚料开发核苷酸类天然调味料是食用菌深加工的重要方向。

发明内容

本发明的目的是利用食用菌及其下脚料制备应用于调味品的天然核苷酸，解决食用菌加工制备核苷酸的工艺、特别是利用食用菌下脚料制备核苷酸的技术问题，扩展了食用菌及其下脚料的利用途径，提高了食用菌下脚料的利用价值。

本发明的目的是通过下列技术方案实现的：

1、一种从食用菌中提取的核苷酸混合物，其特征在于该核苷酸混合物是通过下列方法制备得到的：

a.提取核酸：食用菌或食用菌下脚料加水磨成匀浆，调节pH9-12，微波提取，过滤，调节pH7，得提取液；

b.浓缩纯化核酸：提取液经离心分离、中空纤维超滤膜富集分离、浓缩，浓缩液调节pH，在蛋白等电点静置过夜，离心，上清液调节pH，在核酸等电点静置过夜，离心，取沉淀物，洗涤，干燥，得核酸；

c.酶解：核酸加水溶解，加入5’-磷酸二酯酶进行酶解成5’-核苷酸；

d.收集核苷酸：利用阴离子交换树脂分离富集核苷酸，得到食用菌核苷酸混合物。

所述的核苷酸混合物，该核苷酸混合物是通过下列方法制备得到的：

(1)食用菌或食用菌下脚料制浆：食用菌或食用菌下脚料加水，料∶水重量比为1∶3～6，磨成匀浆状物，备用；

(2)核酸提取：

a.上述匀浆状物以1mol/L NaOH调节pH 11，加入NaCl使其浓度达4％，用微波提取，提取功率为300W，时间为30min.，提取1～2次，所得提取液300目过滤，离心(4000r/pm)15min，再用1mol/LHCl调节pH为7，得到提取液；

b.提取液经滤膜孔径为5000道尔顿的中空纤维超滤膜分离，控制压力为0.2mPa，温度为25℃，膜通量为60～140ml/min.，核酸被截留；

c.所得核酸截留液用6mol/L HCl调pH 4.2，4℃静置过夜，离心，得上清液；

d.所得上清液再用6mol/L HCl调pH 2.0，4℃静置过夜，离心，得到初步纯化的核酸沉淀物；

e.所得沉淀用50％乙醇冲洗，离心，60℃，0.09Mpa，真空干燥时2h，得到核酸干品；

(3)核酸酶解

称取上述制得的核酸干品，加蒸馏水，超声波辅助溶解，制成浓度为0.2wt％的核酸溶液，加入一定量5’-磷酸二酯酶酶液，酶解条件为：酶解时间3h、温度40℃、pH 5.8、酶底比为1300U/g；酶解结束，100℃灭酶10min，离心即得核苷酸混合物溶液；

(4)核苷酸富集分离

a.核酸经酶解成混合核苷酸后，调样液浓度为0.75mg/mL的核苷酸混合酶解液，用1mol/L NaOH调节核苷酸混合酶解液使其为最适pH10.0；

b.步骤a所得样液上阴离子交换树脂柱，控制上样速度1mL/min，上样液体积为树脂体积的8倍；