[发明专利]一种罗丹明6G的免疫亲合层析柱及其制备方法和用途

权利要求书

1.一种制备罗丹明6G免疫亲合层析柱的方法，该方法包括下列步骤：

a)将罗丹明6G特异性抗体与溴化氰活化的Sepherose4B胶混合，用转鼓搅拌，偶联过夜；烧结玻璃滤器抽滤偶联胶，PBS洗脱未结合抗体，每次5毫升，洗4次；用1M乙醇胺封闭未结合位点，加过量乙醇胺孵育2.5小时，抽滤乙醇胺，用偶联缓冲液抽洗，然后再用HAC，Tris-Hcl缓冲液交替洗涤共4次，每次5ml；

b)将偶联后的胶装入塑料柱中，装注1ml/柱，稍用力压紧，即得所述的罗丹明6G免疫亲合层析柱。

c)将所制备的罗丹明6G免疫亲合层析柱与氧化铝柱串联，及得直接检测罗丹明6G的免疫亲合层析柱。

2.根据权利要求1所述方法制备的罗丹明6G免疫亲合层析柱，该免疫亲合层析柱包括偶联有罗丹明6G特异性抗体的Sepharose4B与装载该亲和材料的塑料柱，还进一步包括串联的氧化铝柱。

3.权利要求2所述的罗丹明6G免疫亲合柱，其中所述的罗丹明6G特异性抗体为多克隆抗体或单克隆抗体。

4.权利要求2或3所述的克仑特罗免疫亲合层析柱，其进一步还包括上样缓冲液、淋洗液及洗脱液。

5.权利要求4所述的罗丹明6G免疫亲合层析柱，其中所述的上样缓冲液为PBS，所述淋洗液为PBST，所述的洗脱液为体积比为97∶3的甲醇/1M乙酸混合物。

6.权利要求2所述的罗丹明6G免疫亲合层析柱的使用方法，该方法包括：

a)取出4℃保存的免疫亲和层析柱及上样缓冲液、淋洗液及洗脱液，回至室温，用上样缓冲液充分淋洗亲和层析柱，除去储存Buffer中含的蛋白和防腐剂；

b)将处理好的待检样品用上样缓冲液稀释至所需体积，上样，上样液滴干后，淋洗液淋洗柱体，弃去，吸耳球吹干柱内溶液；

c)用洗脱液洗脱特异性结合的罗丹明6G；

d)洗脱下的罗丹明6G流经串联的氧化铝柱，利用其荧光检测罗丹明6G。