[发明专利]一种新的海洋疣孢菌菌株及其应用

权利要求书

1.一种新的海洋疣孢菌菌株，其特征在于：所述海洋疣孢菌菌株为疣孢菌FIM06031(Verrucosispora sp.FIM06031)，于2010年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.3924。

2.一种抑制肿瘤的萜类化合物FW03104，其特征在于：所述萜类化合物FW03104是通过分离提取疣孢菌FIM06031的发酵液获得的，该萜类化合物FW03104的化学结构式为：

3.如权利要求2所述抑制肿瘤的萜类化合物FW03104，其特征在于：其具有下述物理化学性状：

(1)颜色和外观：白色无定形粉末；

(2)分子式：C₂₃H₃₂O₃；

(3)高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)

测量值：m/z 379.2249[M+Na]⁺

理论值：m/z 379.2351[M+Na]⁺；

(4)¹H核磁共振波谱(MEOD，400MHz)

δ(ppm)：4.54(dd)，1.03，1.79，1.41，1.76，1.92(m)，1.49，1.94，1.11，1.84，1.75(s)，4.71(d)，0.94(s)，1.15(s)，3.38(s)，7.36，7.31，7.50；

(5)¹³C核磁共振波谱(MEOD，400MHz)

δ(ppm)：83.0，41.7，72.0，54.1，26.2，26.8，27.6，47.2，41.4，39.5，151.6，21.5，108.9，14.5，22.5，173.3，49.9，135.9，130.4，129.6，128.1；

(6)溶解度：溶于甲醇，丙酮，乙腈，乙酸乙酯和二甲亚砜；微溶于正己烷和石油醚；不溶于水。

4.如权利要求2所述抑制肿瘤的萜类化合物FW03104，其特征在于：其制备方法的具体步骤为：

(1)制备疣孢菌FIM06031的发酵液：首先将一铂环疣孢菌FIM06031淀粉天冬素琼脂斜面培养物接入种子培养基，温度35℃，转速240rpm/min，培养时间45h，然后按10％移种量转入发酵培养基，温度28℃，转速240rpm/min，振荡培养96～120h；

(2)提取：将经步骤(1)培养所得的疣孢菌FIM06031菌株发酵液通过4500rpm离心15min后，把获得的菌丝渣用2倍体积的95％乙醇浸泡2次，浸泡液减压浓缩，浓缩液用等量体积的乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩，得浸膏状提取物；

(3)分离：将步骤(2)获得的提取物采用正相硅胶柱层析，以环己烷∶丙酮溶剂梯度洗脱，薄层层析检测，收集含萜类化合物FW03104的流份；再经C₁₈反相柱层析，以甲醇∶水梯度洗脱，薄层层析检测，收集含萜类化合物FW03104的流份；再经Sephadex LH-20凝胶柱层析，以丙酮洗脱，薄层层析检测，收集含萜类化合物FW03104的流份；再经正相硅胶柱层析，以氯仿∶甲醇溶剂梯度洗脱，薄层层析检测，得到对肿瘤细胞具有细胞毒活性的萜类化合物FW03104纯品。

5.如权利要求4所述抑制肿瘤的萜类化合物FW03104，其特征在于：

所述种子培养基的组分为：可溶性淀粉1.5％，葡萄糖0.5％，蛋白胨0.5％，酵母粉0.5％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，NaCl 0.05％，(NH₄)₂SO₄0.05％，CaCO₃0.1％，50％陈海水配制，pH 7.5；

发酵培养基的组分为：可溶性淀粉4％，葡萄糖0.5％，黄豆饼粉2.5％，酵母粉0.5％，MgSO₄·7H₂O 0.05％，K₂HPO₄ 0.05％，CaCO₃ 0.1％，50％陈海水配制，pH 7.8。