[发明专利]一种新的海洋疣孢菌菌株及其应用

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种微生物及其应用，尤其涉及一种新的海洋疣孢菌菌株FIM06031及应用其产生的抗肿瘤活性先导化合物FW03104。

【背景技术】

疣孢菌属(Verrucosispora)最早分自沼泽淤泥，属于放线菌目小单孢菌科(Micromonosporaceae)，因孢子表面有疣状突起而得名，随培养时间增长，孢子表面的疣会变为毛发状，革兰氏阳性，不抗酸，严格好氧，化能异养菌，基丝发达，分枝有隔，直径0.4μm，产生单个不游动孢子。已报道的疣孢菌属菌种很少，菌种大部分来自于海洋、红树林。来源于疣孢菌属菌种的次级代谢产物的研究报道少。2004年德国Tübingen大学Bister等从疣孢菌AB-18-032次级代谢产物中得到了结构新颖的多环聚酮类抗生素abyssomicinB～D，其中abyssomicin C强烈抑制革兰氏阳性菌的生长，甚至可以抑制耐甲氧西林金葡菌(MRSA)的生长。2008年德国Tübingen大学Fiedler等从疣孢菌MG-37中发现新型抗肿瘤的呋喃衍生物Proximicin A，B和C。Proximicins在结构上含有4-氨基呋喃-2-羧酸，是一种新发现的γ-氨基酸。Proximicins抗菌活性较弱，但具有很强的针对肠道上皮肿瘤细胞、乳腺癌、肝癌的抗肿瘤活性，正被作为新的抗癌候选药物进行深入地研究和开发。

【发明内容】

本发明所要解决的技术问题在于提供一种新的海洋疣孢菌菌株FIM06031，该疣孢菌菌株FIM06031于2010年6月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCC NO.3924，且通过提取分离该新菌株的发酵液获得一种能够抑制肿瘤的萜类先导化合物。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的：

本实验室从东海福建莆田平海海域的海绵中分离到几十株共附生放线菌，并筛选到一株抗肿瘤活性很好的放线菌。通过菌株培养特征、生理生化特性和16S rRNA基因系统进化分析，将其鉴定为疣孢菌属的一个菌株。

进一步地，从该菌株的发酵液中分离到一个具有细胞毒活性很强的结构新颖的萜类化合物FW03104，该萜类化合物FW03104的化学结构式为：

进一步地，该萜类化合物FW03104具有下述物理化学性状：

(1)颜色和外观：白色无定形粉末；

(2)分子式：C₂₃H₃₂O₃；

(3)高分辨电喷雾质谱(HR-ESI-MS)

测量值：m/z 379.2249[M+Na]⁺

理论值：m/z 379.2351[M+Na]⁺；

(4)¹H核磁共振波谱(MEOD，400MHz)

δ(ppm)：4.54(dd)，1.03，1.79，1.41，1.76，1.92(m)，1.49，1.94，1.11，1.84，1.75(s)，4.71(d)，0.94(s)，1.15(s)，3.38(s)，7.36，7.31，7.50；

(5)¹³C核磁共振波谱(MEOD，400MHz)

δ(ppm)：83.0，41.7，72.0，54.1，26.2，26.8，27.6，47.2，41.4，39.5，151.6，21.5，108.9，14.5，22.5，173.3，49.9，135.9，130.4，129.6，128.1；

(6)溶解度：溶于甲醇，丙酮，乙腈，乙酸乙酯和二甲亚砜；微溶于正己烷和石油醚；不溶于水。

进一步地，所述萜类化合物FW03104制备方法的具体步骤为：

(1)制备疣孢菌FIM06031的发酵液：首先将一铂环疣孢菌FIM06031淀粉天冬素琼脂斜面培养物接入种子培养基，温度35℃，转速240rpm/min，培养时间45h，然后按10％移种量转入发酵培养基，温度28℃，转速240rpm/min，振荡培养96～120h；

(2)提取：将经步骤(1)培养所得的疣孢菌FIM06031菌株发酵液通过4500rpm离心15min后，把获得的菌丝渣用2倍体积的95％乙醇浸泡2次，浸泡液减压浓缩，浓缩液用等量体积的乙酸乙酯萃取3次，减压浓缩，得浸膏状提取物；