[发明专利]高纯度大豆皂苷单体的制备方法

权利要求书

1.一种高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征在于，以大豆皂苷含量较为丰富的大豆胚芽为原料，经脱脂后，先用70％体积百分比乙醇水溶液提取，再经大孔吸附树脂固相萃取得到大豆皂苷和大豆异黄酮粗提物；

然后，用凝胶色谱法分子层析分部分离大豆皂苷和大豆异黄酮；

最后，采用液相色谱、蒸发光散射检测器与二极管阵列检测器检测大豆皂苷单体，并采用液相色谱-质谱联用的方法鉴别大豆皂苷单体种类，采用制备液相色谱分离得到≥95.0％的高纯度的单体大豆皂苷。

2.根据权利要求1所述的高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征是，包括步骤如下：

①利用大豆胚芽粉制备大豆皂苷和大豆异黄酮粗提物；

②凝胶色谱法分部分离大豆皂苷和大豆异黄酮；

③采用制备液相色谱纯化分离单体大豆皂苷；

④采用液相色谱、蒸发光散射检测器与二极管阵列检测器检测大豆皂苷单体；

⑤采用液相色谱-质谱联用的方法获得高纯度的单体大豆皂苷。

3.根据权利要求1或者2所述的高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征是，步骤①中所述的大豆皂苷和大豆异黄酮粗提物，其制备方法为：

A、脱脂：用石油醚(30-60℃)在索氏抽提装置中进行脱脂抽提大约3h左右，取出后在通风处自然挥干石油醚；

B、溶剂提取：将脱脂的大豆胚芽粉按采用10∶1的液料比为mL/g，溶于约的70％的乙醇水溶液，置于摇床上，在25℃水浴中摇晃浸提大约4h左右，或辅以频率为20KHz的超声波预处理45min，过滤，旋转蒸发回收乙醇；

C、阳离子树脂去杂：将大豆皂苷提取液加入装有弱酸性阳离子树脂的吸附柱中，流速0.5-2.0BV/h，流出液反复上柱3次，100ml 15％甲醇水溶液洗脱；旋转蒸发回收甲醇得洗脱液；

D、固相萃取：将上述大豆皂苷提洗脱液加入装有大孔吸附树脂的吸附柱中，室温下，流速控制在0.5-2.0BV/h；1-5BV的去离子水，室温下，流速控制在0.5-2.0BV/h洗脱杂质；1-5BV的≥95％的低级醇于室温下2.0-5.0BV/h冲洗吸附柱，旋转蒸发回收低级醇得洗脱液；洗脱液冻干得到大豆皂苷和大豆异黄酮粗提物粉末。

4.根据权利要求1所述的高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征是，步骤②中所述的凝胶色谱法，分部分离大豆皂苷和大豆异黄酮的技术条件是：皂苷和大豆异黄酮粗提物粉末1g用2.0-3.0mL甲醇溶解，流动相为甲醇、进样体积为200-500μL、流动相流速为0.5-0.8mL/min、二极管阵列吸收检测波长为215nm和295nm，监控DDMP大豆皂苷。

5.根据权利要求1所述的高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征是，步骤③所述的制备液相色谱法分析条件是：C18反相色谱制备分离柱，温度为30℃；样品浓度为1g皂苷样品溶于2ml 50％体积百分比甲醇水溶液，进样体积为100μL；流动相为A：0.001％体积百分比乙酸水溶液，B：0.001％体积百分比乙酸乙腈溶液；流动相流速为5mL/min；检测器为PDA二极管阵列检测器；HPLC梯度洗脱，分部收集保留时间≥40min的洗脱液；旋转蒸发回收乙腈，冻干浓缩液得到。

6.根据权利要求1所述的高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征是，步骤④中所述的采用的液相色谱法是指：C18反相色谱分析性分离柱；样品浓度：80mg皂苷样品溶于10ml 1∶9体积百分比乙腈水溶液；进样体积：20μl；流动相：A：0.001％体积百分比乙酸水溶液，B：0.001％体积百分比乙酸乙腈溶液；流动相流速：1ml/min；检测器：蒸发光散射PDA二极管阵列检测器，HPLC梯度洗脱。

7.根据权利要求1所述的高纯度大豆皂苷单体的制备方法，其特征是，步骤⑤中所述的液相色谱-质谱联用，通过电喷雾电离质谱得到大豆皂苷单体分子量从而获得高纯度的单体大豆皂苷。