[发明专利]检测多种鱼类病原的基因芯片及其检测方法

权利要求书

1.一种检测多种鱼类病原的基因芯片，其特征在于将淋巴囊肿病毒、流行性造血器官坏死症病毒、鱼细胞肿大病毒、石斑鱼虹彩病毒、病毒性神经坏死病毒RGNNV型、病毒性神经坏死病毒BFNNV型、病毒性神经坏死病毒SJNNV型、病毒性神经坏死病毒TPNNV型、病毒性神经坏死病毒TNV型、传染性造血器官坏死症病毒、病毒性出血败血症病毒、传染性胰脏坏死病病毒、獅鱼病毒性腹水病毒和传染性鲑鱼贫血病毒的探针；淀粉卵涡边虫和三代虫的探针以及鱼立克次氏体的探针点在基因芯片载体上，各探针的序列信息如下：

2.如权利要求1所述的一种检测多种鱼类病原的基因芯片，其特征在于上述的基因芯片载体上还点制有表面化学质控的探针、阴性对照质控的探针、杂交阳性外对照质控探针和整个流程监控的阳性内对照质控的探针；探针的序列信息如下：

3.如权利要求1或2所述的一种检测多种鱼类病原的基因芯片，其特征在于上述的基因芯片载体为固相载体尼龙膜。

4.权利要求书1或2所述的一种检测多种鱼类病原的基因芯片的检测方法，依次包括以下步骤：(1)待检样品准备、(2)地高辛标记的PCR扩增、(3)预杂交和杂交、(4)加入碱性磷酸酶标记的地高辛抗体、(5)显色、(6)结果判读步骤，其特征在于步骤(2)中的地高辛标记的PCR扩增体系是：无菌去离子水17.25μL，10×PCR buffer 2.5μL，20mM的MgCl₂ 1.5μL，PCR地高辛标记混合物0.5μL，各探针对应的10μM正向引物和10μM反向引物各1μL，5unit/μL的rTaq DNA聚合酶0.25μL，待检样品DNA 1μL，该反应体系总体积25μL；PCR扩增程序：94℃ 4min；94℃ 30s，57℃ 30s，72℃ 40s，35个循环；72℃延伸10min，4℃保温，其中各正向引物和反向引物的序列信息如下：

5.如权利要求4所述的一种检测多种鱼类病原的基因芯片的检测方法，其特征在于上述淋巴囊肿病毒LCDV、流行性造血器官坏死症病毒EHNV、鱼细胞肿大病毒、石斑鱼虹彩病毒GIV、病毒性神经坏死病毒TNV型病原的正向引物和反向引物存在替补引物，替补引物的序列信息如下：