[发明专利]在重组大肠杆菌中生产人的类胰岛素生长因子-1的方法无效
| 申请号： | 201010243832.8 | 申请日： | 2010-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN101948837A | 公开（公告）日： | 2011-01-19 |
| 发明（设计）人： | 徐志南;黄磊;蔡谨;张丹萍 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | C12N15/12 | 分类号： | C12N15/12;C12N15/70;C12N1/21;C07K19/00;C07K14/475;C07K1/22;C07K1/18 |
| 代理公司： | 杭州求是专利事务所有限公司 33200 | 代理人： | 周烽 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 大肠杆菌 生产 胰岛素 生长因子 方法 | ||
1.一种在重组大肠杆菌中生产人的类胰岛素生长因子-1的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：
(1)设计和合成hIGF-1蛋白相关基因：设计上下游引物，并合成hIGF-1基因，合成的hIGF-1基因具有SEQ ID NO.1所示的基因序列。
(2)构建hIGF-1融合蛋白表达载体。
(3)用表达载体转化大肠杆菌宿主构建基因工程菌。
(4)用基因工程菌表达hIGF-1融合蛋白。
(5)亲和层析分离纯化hIGF-1融合蛋白。
(6)用肠激酶切去hIGF-1融合蛋白的融合标签。
(7)阳离子交换分离纯化。
2.根据权利要求1所述在重组大肠杆菌中生产人的类胰岛素生长因子-1的方法，其特征在于，所述步骤(5)具体为：将适量Ni-NIA树脂置于层析柱内，用上样缓冲液平衡，然后加入细菌裂解液的上清并使其在柱内平衡，用结合了His标签的融合蛋白用洗脱液进行洗脱。
3.根据权利要求1所述在重组大肠杆菌中生产人的类胰岛素生长因子-1的方法，其特征在于，所述步骤(6)具体为：将按照步骤(5)亲和纯化后的hIGF-1融合蛋白通过凝胶过滤层析将原有缓冲液置换成肠激酶酶切的缓冲液，然后将经过缓冲液置换的hIGF-1融合蛋白在20℃下加肠激酶消化9h。
4.根据权利要求1所述在重组大肠杆菌中生产人的类胰岛素生长因子-1的方法，其特征在于，所述步骤(7)具体为：将适量SP阳离子交换树脂置于层析柱内，用上样缓冲液平衡，然后加入肠激酶酶切后的融合蛋白溶液并使其在柱内平衡，并用5倍体积的上样缓冲液冲柱，目标蛋白hIGF-1用洗脱缓冲液进行洗脱，纯化后的hIGF-1蛋白用G10凝胶柱脱盐后，经冷冻干燥得到hIGF-1蛋白粉末。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于浙江大学，未经浙江大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/201010243832.8/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
- 上一篇：长杆件运输装置
- 下一篇：一种汽车排气管存放架
