[发明专利]同时检测人CMV和BK病毒DNA的引物序列及定量检测试剂盒

权利要求书

1.一种用于对巨细胞病毒(CMV)和BK病毒(BKV)脱氧核糖核酸片段(DNA)进行定量检测的一组引物和探针。其特征是一对针对CMV的引物包括上游引物SEQ ID NO.1和下游引物SEQ IDNO.2，及一条探针SEQ ID NO.3；和一对针对BK的引物包括上游引物SEQ ID NO.4和下游引物SEQ ID NO.5，及一条探针SEQ ID NO.6。

2.根据权利要求1所述的对CMV和BKV的DNA进行定量检测的一组引物和探针，其特征在于可定量测定CMV和BKV的特定靶DNA片段。CMV的特定靶DNA片段为SEQ ID NO.7，BKV的特定靶DNA片段为SEQ ID NO.8。

3.根据权利要求1所述的对CMV DNA和BKV的DNA进行定量检测的一组引物和探针，其特征在于可定量测定含CMV和BKV的特定靶DNA片段的标本和标准品。此标准品为纯化的质粒，其同时含用于此方法检测的特定CMV DNA和BKV DNA片段SEQ ID NO.9。其CMV DNA片段经引物对SEQ ID NO.10、SEQ ID NO.11扩增而获得，其BKV DNA片段经引物对SEQ ID NO.12、SEQ ID NO.13扩增而获得。

4.一种用于对CMV和BKV的DNA进行定量检测的试剂盒，其特征包括1，由下述试剂组成：

试剂A：由针对CMV、BKV的引物和探针混合组成250μL溶液。溶液包含5μM SEQ ID NO.1、5μM SEQ ID NO.2、5μM SEQ ID NO.4、5μM SEQ ID NO.5和2μM探针SEQ ID NO.3、2μM探针SEQ ID NO.6；

试剂B：由250μL缓冲液组成，包含1mM dNTPs(包括dATP、dCTP、dGTP、dTTP)、200mMTris-HCl、200mM KCl、100mM(NH₄)₂SO₄，45mM MgSO₄；

试剂C：5U/μL Taq DNA聚合酶；

试剂D：制备的标准品经过梯度稀释达到5E7(5×10⁷拷贝/mL)、5E6、5E5、5E4、5E3，用于标准曲线的制定；

试剂E：阴性对照(无CMV、BKV感染的正常人DNA)；

试剂G：阳性对照(采用5E4的标准品)。