[发明专利]一种黄连中主要生物碱的提取方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种化学单体成分的提取方法，更具体的说涉及一种黄连中主要生物碱的提取方法。

技术背景

黄连Coptis chinensis Franch.的化学成分主要为原小檗性生物碱，从60年代开始，我国就有学者对黄连的化学成分进行研究，先后从黄连根茎中分离鉴定了小檗碱、巴马汀、药根碱、非洲防己碱、黄连碱、表小檗碱等异喹啉类生物碱。目前国内外市售的对照品只有小檗碱、巴马汀、药根碱，而表小檗碱、黄连碱、非洲防己碱因分离困难，中国药品生物制品检定所还没有标准品出售，其他地方也难以买到。

小檗碱是黄连中最主要的生物碱，含量高达5.2％～7.69％。近年来对小檗碱提取工艺的研究很多，针对其他生物碱的工艺研究相对较少。文献报道的以小檗碱为主的生物碱的提取方法有煎煮法、浸渍法、回流提取、超声提取、固液热提取法、酶解法、微波法、微量法、半仿生、超临界萃取提取等；提取溶媒有水、酸水、乙醇、酸性乙醇、石灰乳等。生物碱的分离纯化工艺有大孔树脂纯化、制备型高速逆流色谱、液膜法等。也有一些学者对几种不同的提取方法进行了比较，例如高红旺等对黄柏中黄连素的提取工艺进行了比较，发现酸醇提取优于碱提取和乙醇提取。石继连等运用药典法、回流法、超声法、回流超声法提取黄连中的小檗碱，结果表明回流超声较其他方法时间短、含量高，较适宜提取黄连中的小檗碱。还有学者对黄连药材的粒度、提取温度及乳化剂对黄连提取的影响进行了考察，根据实验结果，20目～40目提取物中含量最高，10目以上居次，40目～80目及80目以下含量急剧下降；随着温度升高，小檗碱得量增高，但在温度达到100℃时，小檗碱被破坏较大；碘酸型阴离子表面活性剂与聚胺类表面活性剂使黄连素提取量降低.而非离子型表面活性剂丙二醇酯在span-80低浓度时对提高提取率有协同作用。

目前还没有一种从黄连中同时分离得到黄连几种主要生物碱，且适用工业化大生产的方法。

发明内容

为解决上述问题，本发明提供了一种连中主要生物碱的提取方法，提取步骤包括提取黄连渗漉液、酸性条件下初提生物碱、初提生物碱母液上大孔树脂除杂得到生物碱混合物、生物碱混合物上色谱柱粗分离和结晶分离精制，所述上色谱柱粗分离的步骤为：

1)将上大孔树脂除杂得到的生物碱混合液回收至干得到生物碱混合物；

2)将生物碱混合物用65～85的热水溶解，上C₁₈反相硅胶柱，常压条件下，柱温保持在35～55℃条件下，依次用水、2％乙腈、4％乙腈、6％乙腈、8％乙腈、10％乙腈、12％乙腈、15％乙腈梯度洗脱，根据色带分别接收洗脱液；

3)将上述按色带接收的同一色带的洗脱液，回收至干，用65～85℃的热水溶解，上C₁₈反相硅胶柱，分别用依次用水、1％乙腈、2％乙腈、3％乙腈、4％乙腈、5％乙腈、6％乙腈、7％乙腈洗脱，根据色带分别回收洗脱液；

4)将根据色带分别回收洗脱液重复步骤3)操作，直到各个色带通过薄层检测为同一单点为止，依据极性从大到小得到组分I、组分II、组分III和组分IV。

所述的提取黄连渗漉液的步骤为：将黄连粉末用90％乙醇浸润，上渗滤柱；依次用95％乙醇、60％乙醇、30％的乙醇、水、0.5％硫酸梯度0.5％硫酸梯度渗漉，合并渗漉液，过滤得到黄连渗漉液。

所述酸性条件下初提生物碱为：将提取黄连渗漉液回收至不含乙醇，加酸调pH 2～3，静置12～24小时，过滤沉淀，得到黄色沉淀，母液加活性碳脱色，得到初提生物碱母液。

所述初提生物碱母液上大孔树脂除杂为：浓缩初提生物碱母液，上D101型大孔树脂柱，用水洗脱至无色，依次用20％乙醇、40％乙醇洗脱；合并乙醇洗脱液，浓缩得到生物碱混合物。

所述结晶分离精制为：组分I用50％乙腈结晶得到盐酸药根碱，母液再用95％乙醇结晶得到盐酸非洲防己碱；

组分II用95％乙醇结晶精制得到盐酸表小檗碱；

组分III用50％乙腈结晶精制得到盐酸黄连碱；

组分IV用50％乙腈结晶得到盐酸小檗碱，母液再用95％乙醇结晶得到盐酸巴马汀。

本发明的有益技术效果是：本发明采用反向色谱柱在常压条件下，分离的方法分离黄连中几种主要的生物碱，较以往的制备色谱分离方法，产量大幅度提高，成本更低，提纯的产品可用做质量标准研究的对照品。

具体实施方式

实施例1黄连渗漉液的制备