[发明专利]玉米丝黑穗病室内快速接种鉴定的方法有效
| 申请号： | 201010246839.5 | 申请日： | 2010-08-06 |
| 公开（公告）号： | CN102051410A | 公开（公告）日： | 2011-05-11 |
| 发明（设计）人： | 王振华;李新海;张林;邸宏;张亚军 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/02 |
| 代理公司： | 哈尔滨东方专利事务所 23118 | 代理人： | 陈晓光 |
| 地址： | 150030 黑龙江*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 玉米 黑穗病 室内 快速 接种 鉴定 方法 | ||
1.一种玉米丝黑穗病室内快速接种鉴定的方法，其特征是：该方法包括如下步骤：
(1)制备玉米丝黑穗病菌菌液：玉米丝黑穗病菌冬孢子粉在室温下干燥6-7天，无菌水清洗，甲醛+高锰酸钾熏蒸25min，接种至麦芽糖水琼脂培养基，28℃下倒置暗培养17h，挑取已经萌发的单个冬孢子，接种至马铃薯葡萄糖培养基，28℃下倒置暗培养15d，将培养好的丝黑穗病菌的菌落刮出，转入2％的蔗糖溶液中，28℃下振荡暗培养48h，调整菌液浓度为6.2×105cfu/ml；
(2)培养玉米幼苗：挑选发育良好玉米种子，放入铺好滤纸的发芽盒中，喷水后放入人工气候箱中，20℃下进行暗培养，直至芽长到3cm；
(3)接种玉米丝黑穗病菌：将步骤(2)中培养的玉米幼苗的中胚轴部位侵入步骤(1)中制备好的玉米丝黑穗病菌菌液中，放入真空干燥器中，盖上盖子，打开真空泵，压力为6X10-2帕处理25-35min将玉米幼苗取出，接种温度为25℃/15℃变温处理；
(4)接种后幼苗的培养：在接种后苗移栽到土壤，保证土壤湿度稳定在20％；
(5)接种效果的检测：接种10d后，取接种部位下1cm下的玉米茎部组织，CTAB法提取DNA，依据玉米丝黑穗病菌基因组上SR3序列设计引物，采用PCR的方法进行接种效果的检测。
2.根据权利要求1所述的玉米丝黑穗病室内快速接种鉴定的方法，其特征是：步骤(5)中所述的引物为：引物1：5-GCAGCCTCAGCATTACTC-3′，引物2：5′-ATACACCTGTGACGGCTG-3′，PCR反应程序为预变性95℃3min，变性95℃30s，退火温度56℃40s，延伸72℃40s，循环37次，终延伸72℃延伸10min，最后4℃保存。
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