[发明专利]猪流感病毒和猪蓝耳病病毒混合病毒样颗粒、制备方法和应用

说明书

技术领域

本发明涉及猪流感病毒和猪蓝耳病病毒混合病毒样颗粒，及其制备和应用。

背景技术

猪流感是由猪流感病毒(Swine influenza virus，SIV)引起的不同日龄、性别和品种猪只的一种急性、热性和高度接触性的呼吸道传染病，其临床上以突发、高热、咳嗽、呼吸困难、衰竭和死亡为特征。各年龄、性别、品种猪均能感染，发病率高。单独感染猪流感病毒可导致猪只生产性能下降，料肉比升高，增重减缓，给猪场造成一定的经济损失。更为严重的是，猪是禽、人、猪流感病毒重组和复制的“混合器”，猪流感病毒不需重组就有最大限度感染人的能力。而且早期的人流感病毒还可以储存于猪体内，并在一定时期内再次感染人。目前，常见的猪流感主要有H1N1、H1N2和H3N2等3种亚型。值得重视的是，SIV更多见与其它疫病，如猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒、猪伪狂犬病毒、传染性胸膜肺炎放线杆菌、猪链球菌、猪附红细胞体等并发或继发感染，使疫情变得反复而复杂，是现代集约化猪场普遍存在且难以根除的猪呼吸道传染病之一，对养猪业危害极大。

甲型H1N1流感病毒的流行不仅给很多国家的养殖业造成了巨大的经济损失，而且对世界范围内的人民公共卫生安全造成了一个很大的挑战。2009年4月爆发于墨西哥的甲型H1N1流感全球瞩目，随后，美国和加拿大等国也相继出现人感染H1N1猪流感的情况并有部分病人死亡。在短期内研制有效疫苗来预防甲型H1N1流感病毒抑制疫情传播和加重迫在眉睫。目前国内生产的用于禽畜预防流感病毒的疫苗大部份是采用传统的鸡胚法培养增殖活病毒，经化学试剂灭活后生产成疫苗。这种技术又分为两类不同的制备法：一是直接用野生型病毒感染鸡胚制备，另一类是先采用反向遗传技术改造野生病毒的遗传性，然后用“拯救”改造的新病毒来感染鸡胚，增殖病毒，生产疫苗。

这些流感疫苗制备技术有其优点，但亦存在着很大的缺陷。尤其是流感感毒的与众不同特性，例如：高频率突变，双重及多重亚型病毒之间遗传物质重组及抗原漂移等——使这些疫苗的长期安全性及有效性受到了极大挑战，甚至产生了“无效疫苗”，难以应付新的突变型H1N1流感病毒的传染。除此以外，这些疫苗制剂还存在着以下不足：

1、生产周期长：从获得新的亚型病毒株到疫苗生产上市，耗时5-8个月，难以遏制新的疫情大爆发。

2、生产条件高：为预防人为的污染环境及生产的活病毒的泄漏扩散，整套生产必须按规定在生物安全三级实验室条件下进行，病毒的灭活必须保证完全，彻底。

3、无法区别被免疫过的猪只与受病毒感染的猪只。

猪繁殖与呼吸综合征(Porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS)又称为猪蓝耳病(Blue ear disease)，其病原为猪蓝耳病病毒(PRRSV)，是一种小的囊膜单股正链RNA病毒。于1987年首先暴发于美国(Keffaber，1989；Zeman et al，1993)，主要表现为妊娠娠母猪发生早产、流产、产死胎、弱仔和木乃伊胎，仔猪和育肥猪发生呼吸道疾病，死亡率升高，饲料报酬率降低。随之加拿大、德国、荷兰等北美洲及欧洲国家也先后报道发生该病(Bilodeau et al，1991；Wensvoort et al，1991)。自1991年起，亚洲地区的我国台湾省、日本、韩国、菲律宾等亦相续报道了该病(Albina et al，1997a；Blahs et al，2000)。我国大陆于1996年首次报道此病并分离到病毒(郭宝清等，1996)，随后该病在我国呈蔓延趋势(蔡雪晖等，2000)。2006年5月份一种所谓的猪“高热病”在我国爆发，并迅速蔓延到全国，给我国养猪业造成了巨大的经济损失，后来“高热病”被证明就是PRRS(Tian et al，2007)，是由PRRSV变异株引起的，现称为“高致病性蓝耳病”。

同多数病毒性疾病的防制相同，对PRRS的防制仍以疫苗免疫预防为主。目前PRRS主要商品化疫苗是灭活苗和弱毒苗两种常规疫苗，使用后虽均可减轻临床症状，但不能阻止强毒感染和病猪的排毒及持续性感染的发生。但目前使用的PRRS商用常规疫苗弱毒疫苗及灭活疫苗因存在安全隐患或免疫效果差的缺陷而不能提供理想的免疫保护。特别危险的是，PRRSV具有抗体依赖增强的特点，就是在猪体内存在抗体的情况下，PRRSV感染能使猪群发病率和死亡率提高，造成更大的损失。因此，研究高效、安全、可靠的疫苗显得非常必要。