[发明专利]海洋拟诺卡氏菌株HY-G及其产生的β-葡萄糖苷酶

说明书

技术领域

本发明属生物技术领域，具体地说是一种海洋拟诺卡氏菌菌株HY-G，本发明还涉及该菌株的产酶方法及其所产生的β-葡萄糖苷酶。 

背景技术

β-葡萄糖苷酶(EC3.2.1.21)，是一类能够水解结合于末端非还原性的β-葡萄糖苷键，同时释放出β-D-葡萄糖和相应的配基的水解酶类。 

β-葡萄糖苷酶广泛地存在于自然界许多动植物和微生物体内。β-葡萄糖苷酶的相对分子量范围一般在40～250KDa之间。目前绝大多数生物所产生的β-葡萄糖苷酶最适pH都在酸性范围，并且变化不大，一般在3.5-5.5之间，仅有少数β-葡萄糖苷酶最适pH在中性或碱性范围内。β-葡萄糖苷酶的最适温度在40～110℃之间都有分布。 

β-葡萄糖苷酶具有多方面的用途。在生物医药领域，由于天然药物中含有种类众多的苷类成分，其中有很大一部分都属于β-葡萄糖苷类。研究发现，天然药物活性成分去除β-葡萄糖基后，往往能提高药效，因此，采用β-葡萄糖苷酶进行天然药物活性成分的生物转化受到重视，该方法具有反应条件温和、特异性高、污染少等优点。在食品工业，β-葡萄糖苷酶作为一种风味酶，可用于果汁风味成分的改善、果酒和茶叶等饮料的增香等；此外，β-葡萄糖苷酶还在纤维素的水解、医学诊断、植物病害防治等方面有着重要的价值。 

发明内容

本发明所要解决的技术问题是针对现有技术的不足，提供一种新的能产β-葡萄糖苷酶的海洋拟诺卡氏菌HY-G(Nocardiopsis sp.HY-G)。 

本发明所要解决的另一个技术问题是提供了上述海洋拟诺卡氏菌HY-G(Nocardiopsis sp.HY-G)产β-葡萄糖苷酶的方法及产品。 

本发明所涉及的菌株是海洋拟诺卡氏菌HY-G(Nocardiopsis sp.HY-G)，该海洋拟诺卡氏菌HY-G已于2010年5月27日保藏在中国典型培养物保藏中心CCTCC，保藏编号为CCTCC NO：M 2010126；保藏单位地址：中国.武汉.武汉大学，电话：027-68754052。 

以下对本发明进行详细的阐述。 

一、本发明所涉及的培养基。 

1、固体培养基(固体海水高氏一号培养基)，其组成如下：20g可溶性淀粉；1g KNO₃；0.5g K₂HPO₄；0.5g MgSO₄·7H₂O；0.01g FeSO₄·7H₂O；1000mL海水。其制法是：将上述成分用海水溶解后，再用NaOH调节初始pH至7.6-7.8，然后加入15g琼脂，121℃灭菌15-20min，即得固体培养基。用于初次平板涂布分离时，还需在调节pH值之前加入0.03％的重铬酸钾以抑制样品中真菌和细菌的生长。 

2、液体发酵培养基(液体海水高氏一号培养基)，其组成如下：20g可溶性淀粉；1g KNO₃；0.5g K₂HPO₄；0.5g MgSO₄·7H₂O；0.01g FeSO₄·7H₂O；1000mL海水。其制法是：将上述成分用海水溶解后得混合物，然后按大豆异黄酮苷∶混合物＝150～200mg/L的比例向混合物中加入大豆异黄酮苷作为产酶诱导物(以诱导其产β-葡萄糖苷酶)，再用NaOH调节初始pH至7.6-7.8， 121℃灭菌15-20min，即得液体发酵培养基。本发明所述的产酶诱导物大豆异黄酮苷为由染料木苷、大豆苷和黄豆黄苷组成的混合物，该混合物中，含大豆苷46.80％(重量百分比)、染料木苷12.98％、黄豆黄苷23.73％，其中的黄豆黄苷对本发明的菌株HY-G的产酶无诱导作用。也可以采用市售的其它比例的大豆异黄酮苷，优选其中含大豆苷40-50％，染料木苷10-15％，其余为黄豆黄苷。 

二、本发明海洋拟诺卡氏菌HY-G(Nocardiopsis sp.HY-G)(以下简称菌株HY-G)的分离。 

1、样品的采集与处理。