[发明专利]琼脂平板筛选降解林可霉素好氧细菌的方法

权利要求书

1.一种琼脂平板筛选降解林可霉素好氧细菌的方法，其特征在于：按下述步骤制备：

(1)基础培养基琼脂平板的制备：按下列浓度配制培养基，K₂HPO₄ 1.0g/L，KH₂PO₄ 0.2g/L，MgSO₄·7H₂O 0.2g/L，CaCl₂·2H₂O 0.04g/L，FeCl₃·6H₂O 0.005g/L，NH₄NO₃ 0.25g/L，琼脂15～20g/L，于121℃灭菌15min，以10ml/个培养皿分装培养基，待培养基冷却凝固后在其表面均匀添加一定量的林可霉素水溶液，静置至表面干燥即可；

(2)琼脂中林可霉素测定方法：采用酸溶加热的方式溶解琼脂平板，通过紫外分光光度法测定林可霉素含量，对琼脂平板中林可霉素进行定量分析，为林可霉素降解菌的筛选奠定基础；

(3)样品采集：从林可霉素生产废渣堆放处的土壤取样，利用无菌水配制成土壤稀释液用于菌种的分离；

(4)菌种分离：取0.2mL土壤稀释液涂布于含0.015g林可霉素的基础培养基固体琼脂平板，30℃下培养5天，经稀释涂布分离单菌落，获得能够以林可霉素为唯一碳源和能源生长的菌株并保存试管中；

(5)菌种筛选：无菌水将分离得到的菌种配成菌悬液，OD值0.8，取0.2mL涂布含0.02g林可霉素的基础培养基琼脂平板中，以不接种的相同平板为空白对照，在30℃培养7天后，在优化得到的最佳酸溶解工艺条件下测定样品，并根据线性回归方程测定出琼脂平板中林可霉素的含量，以林可霉素降解率为指标，筛选林可霉素降解菌。

2.按照权利要求1所述的琼脂平板筛选降解林可霉素好氧细菌的方法，其特征在于：步骤(2)酸溶加热的条件为盐酸浓度1.14mol/L，加盐酸量3mL，加热时间70s。

3.按照权利要求1所述的琼脂平板筛选降解林可霉素好氧细菌的方法，其特征在于：步骤(2)定琼脂平板中林可霉素的标准方程为y＝0.01533+0.00299x，其中x表示林可霉素浓度(ug/ml)，y表示吸光值，方程的相关系数r＝0.99935，浓度范围为0～250ug/mL，待测定的样品在静置30min后，该方法测定是稳定的，在30～120min内，RSD为0.13756％，精密度的RSD为0.2654％，重复性的RSD为0.4328％，样品回收率94.8858％。