[发明专利]骨螺科线粒体16S rRNA基因扩增引物的筛选方法

权利要求书

1.一种骨螺科线粒体16S rRNA基因扩增引物的筛选方法，其特征是a、利用16S rRNA通用扩增引物16S rRNAar：5’-CGCCTGTTTATCAAAAACAT-3’和16S rRNAbr：5’-CCGGTCTGAACTCAGATCACGT-3’扩增出部分骨螺科物种的16S rRNA序列；b、从上述得到的部分骨螺科16SrRNA序列中，通过比对找出比较保守的序列片段，合成多套扩增引物序列；c、从合成的多套扩增引物序列中筛选出扩增骨螺科线粒体16S rRNA基因效果最好的一对引物16S rRNAarM：5’-GCGGTACTCTGACCGTGCAA-3’和16S rRNAbrM：5’-TCACGTAGAATTTTAATGGTCG-3’。

2.如权利要求1所述的骨螺科线粒体16S rRNA基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的部分骨螺科物种为从中国南北沿海共采集的骨螺科10个属25个种类的160个个体。

3.如权利要求1所述的骨螺科线粒体16S rRNA基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的部分骨螺科物种的16S rRNA序列为利用16S rRNA通用扩增引物对骨螺科25个种类的160个个体进行PCR扩增和测序后，共获得的15个种类60个个体的16S rRNA序列。

4.如权利要求1所述的骨螺科线粒体16S rRNA基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的比较保守的序列片段为将获得的60个个体的16S rRNA序列进行比对后，找出的比较保守、碱基变异度最小的序列片段。

5.如权利要求1所述的骨螺科线粒体16S rRNA基因扩增引物的筛选方法，其特征是所述的扩增骨螺科线粒体16S rRNA基因效果最好的一对引物16S rRNAarM和16S rRNAbrM的10μLPCR反应体系和扩增条件为：1μL10×buffer Mg²⁺，1μL DNTP(2mM)，0.6μL Mgcl₂(25mM)，1μL引物MLCO1490F(10μM)，1μL引物MHCO2198R(10μM)，0.08μL r-Taq(5u/μL)，1μL DNA模板，4.32μL双蒸水，PCR热循环的退火温度为48℃～50℃。