[发明专利]一种在同一体系中检测IgM抗体和IgG抗体的方法

说明书

技术领域

本发明涉及体外检测技术领域，具体地涉及一种在免疫检测样本时在同一反应体系中测定样本中针对某种抗原的IgM抗体和IgG抗体的方法和相应的试剂盒。

背景技术

在临床实验室诊断中，有很多是通过检测机体产生的针对某种细菌或病毒IgM抗体和IgG抗体来确认其感染或曾经感染，比如弓形虫，巨细胞病毒(CMV)等。目前检测人体针对某种病原体的IgM抗体和IgG抗体，是通过两个试剂盒来实现的，这样在临床使用过程中，试剂的消耗量，所需病人的样本量及检测工作量都较大。

因此，本领域的这项在同一反应体系中测定样本中IgM抗体和IgG抗体的方法，能大大降低目前的人力物力财力。

发明内容

本发明的目的就是提供一种能在同一反应体系中测定样本中针对某种抗原的IgM抗体和IgG抗体的方法，从而节省临床检测更为简便的、更为省时，也更为经济。

在本发明的第一方面，提供了一种在同一体系中检测IgM抗体和IgG抗体的方法，包括以下步骤：

(a)将待测样品与第一抗原溶液混合，其中所述的第一抗原溶液含有1-50种不同的抗原，所述的每一种抗原偶联于不同的微球而形成式I所示的第一抗原-微球的二元复合物，

Ag-bead    (I)

式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示抗原与微球之间的共价键；

从而使待测样品中的抗体与所述抗原形成“抗体-抗原-微球”三元复合物，其中所述的“抗体-抗原-微球”三元复合物包括“IgM抗体-抗原-微球”三元复合物”和“IgG抗体-抗原-微球”三元复合物；

(b)将步骤(a)形成的溶液与第二抗体溶液混合，其中所述的第二抗体溶液含有1-50种不同的带有可检测信号的第二抗体，所述的每一种第二抗体分别是针对该抗原的IgM抗体的抗体，从而形成“第二抗体-IgM抗体-抗原-微球”的IgM抗体四元复合物；

(c)检测IgM抗体四元复合物中不同微球的可检测信号，从而确定待检测样品中各IgM抗体的存在与否，

附加条件是待测样品与第一抗原溶液和第二抗体溶液的混合，可依次进行，也可同时进行；

(d)将步骤(c)检测后的形成的溶液与第三抗体溶液混合，其中所述的第三抗体溶液含有1-50种不同的带有可检测信号的第三抗体，所述的每一种第三抗体分别是针对该抗原的IgG抗体的抗体，从而形成“第三抗体-IgG抗体-抗原-微球”的IgG抗体四元复合物；

(e)检测IgG抗体四元复合物中不同微球的可检测信号，从而确定待检测样品中各IgG抗体的存在与否。

在另一优选例中，所述的第二抗体带有的可检测信号和第三抗体带有的可检测信号是相同的或不同的。

在另一优选例中，所述的可检测信号是荧光信号。

在另一优选例中，所述的微球是平均粒径为2-10μm、且染上不同荧光的聚苯烯微球。

在另一优选例中，所述的抗原包括：病毒抗原、肿瘤抗原、细菌抗原、寄生虫抗原等。

在另一优选例中，所述的抗原包括弓形虫抗原、风疹病毒抗原、巨细胞病毒抗原、甲肝病毒抗原、乙肝病毒抗原、丙肝病毒抗原、单纯疱疹病毒抗原。

在另一优选例中，所述的第一抗原溶液含有2-30种不同的抗原，更佳地含有3-20种不同的抗原。

在另一优选例中，在所述的第二抗体溶液和第三抗体溶液中，各第二抗体和第三抗体的浓度为0.1-200ug/ml。

在另一优选例中，步骤(c)和(e)中用Luminex xMAP法进行检测。

在另一优选例中，在步骤(c)和(e)中包括：将测定的可检测信号与质控或标准曲线进行比较，从而确定待检测样品中抗体的存在与否，和/或数量。

在另一优选例中，所述的第二抗体带有的可检测信号和第三抗体带有的可检测信号是相同的，并且在步骤(e)中包括步骤：将步骤(e)中测得的可检测信号的读数减去步骤(c)中测得的可检测信号的读数，作为判断IgG抗体存在与否，和/或数量的依据。

在本发明的第二方面，提供了一种用于在同一体系中检测IgM抗体和IgG抗体的试剂盒，它包括以下组分：

(a’)第一容器以及装于该容器中的第一抗原溶液，其中所述的第一抗原溶液含有1-50种不同的抗原，所述的每一种抗原偶联于不同的微球而形成式I所示的第一抗原-微球的二元复合物，

Ag-bead    (I)

式中，Ag表示抗原，bead表示微球，-表示抗原与微球之间的共价键；