[发明专利]一种表达faeG的基因工程益生菌的构建方法及用途

权利要求书

1.一种表达faeG的基因工程益生菌的构建方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

(1)获得大肠杆菌粘附素FaeG基因：以产肠毒素性大肠杆菌C83907质粒DNA为模板，设计合成含有Nco I和Xba I酶切位点的上下游引物P1和P2，上下游引物P1和P2分别具有SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5的基因序列。采用PCR方法扩增faeG目的基因片段。将扩增的faeG目的基因片段与pMD18-T载体连接，得重组质粒，转入大肠杆菌TOP10中，该重组质粒命名为pMD-faeG，其具有SEQ ID NO.1所示的基因序列。

(2)构建重组表达载体pNZ8148-faeG：将表达载体质粒pNZ8148和pMD-faeG用限制性内切酶Nco I和Xba I双酶切，纯化回收双酶切载体片段和目的片段。目的片段和双酶切载体片段连接后转化感受态E.coli MC1061，提取重组质粒，命名为pNZ8148-fae G，其具有SEQ ID NO.2所示的基因序列。

(3)构建表达大肠杆菌粘附素基因faeG的重组乳酸乳球菌：采用电转化方法将重组质粒pNZ8148-faeG转化感受态细胞L.lactis NZ9000，利用氯霉素对转化子进行筛选，得重组菌，命名为NZ9000/8148-faeG，其具有SEQ ID NO.3所示的基因序列。

(4)大肠杆菌粘附素FaeG在乳酸乳球菌中的诱导表达及SDS-PAGE、Westernblot分析：挑取重组菌NZ9000/8148-faeG接种于含有10mg/mL氯霉素的GM17液体培养基中，30℃静置培养过夜。培养物以3％的比例转接于500ml含氯霉素GM17培养液中，培养至OD₆₀₀＝0.5～0.6时，加入诱导剂nisin，使其终浓度为5ng/ml，继续培养3h。

2.一种权利要求1所述表达产肠毒素性大肠杆菌粘附素基因faeG的基因工程益生菌在预防哺乳仔猪和断奶仔猪大肠杆菌性腹泻中的应用。